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国境口岸是国家的重要门户，为了保障国家的卫生安全，需要对进出口的医学媒介昆虫进行鉴定。传统的鉴定方法需要对昆虫的形态进行观察，需要专业的昆虫学知识和经验，而且鉴定过程繁琐、耗时长。随着分子生物学技术的发展，DNA条形码技术被广泛应用于生物物种的鉴定。本标准就是针对国境口岸医学媒介昆虫的DNA条形码鉴定制定的操作规程。

1.样品采集
样品采集应选择活体昆虫，采集时应注意不破坏昆虫的形态结构，避免样品受到污染。采集的样品应及时送到实验室进行处理。

2.DNA提取
DNA提取是鉴定的关键步骤，提取的DNA质量和纯度直接影响后续的PCR扩增和测序结果。本标准推荐使用商业化的DNA提取试剂盒进行提取，也可以根据实验室的具体情况选择其他的提取方法。

3.PCR扩增
PCR扩增是将目标DNA序列扩增到足够数量的关键步骤，本标准推荐使用COI基因作为DNA条形码，PCR扩增应选择COI基因的保守区域进行扩增。PCR反应体系和反应条件应根据实验室的具体情况进行优化。

4.测序
PCR扩增后的产物应进行测序，本标准推荐使用Sanger测序技术进行测序。测序结果应进行质量控制，去除低质量序列和杂质序列。

5.序列分析和鉴定结果判定
测序后的序列应进行比对和分析，本标准推荐使用BLAST进行比对。根据比对结果和系统发育树的构建，可以对样品进行鉴定。

相关标准：
GB/T 19423-2003 生物技术实验室安全规范
GB/T 19424-2004 生物技术实验室质量管理规范
GB/T 19425-2004 生物技术实验室技术规范
GB/T 19426-2003 生物技术实验室设施规范
GB/T 19427-2004 生物技术实验室人员规范