一、范围
本标准适用于出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格及试验方法
GB/T 20394 液相色谱法分离分析术语和定义

三、仪器和设备
1. 液相色谱仪：具有紫外检测器和反向相色谱柱；
2. 电子天平：分度值为0.1mg；
3. 超声波清洗器：功率为100W。

四、试剂和材料
1. 富马酸单甲酯和富马酸二甲酯标准品：纯度≥98%；
2. 乙腈：色谱纯；
3. 磷酸二氢钾：分析纯；
4. 磷酸氢二钠：分析纯；
5. 水：离子交换纯。

五、样品处理
1. 取样：按照GB/T 16819的规定进行取样；
2. 样品制备：将样品粉碎并过筛，取约1g样品加入50mL离子交换纯水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL离子交换纯水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即为样品溶液。

六、操作步骤
1. 仪器条件设置
（1）色谱柱：C18色谱柱，250mm×4.6mm，5μm；
（2）流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（体积比为70:30），pH值调节至3.0；
（3）流速：1.0mL/min；
（4）检测波长：220nm；
（5）进样量：20μL。
2. 标准曲线的绘制
（1）取富马酸单甲酯和富马酸二甲酯标准品各5mL，分别加入10mL离子交换纯水中，制成浓度分别为0.1mg/mL的标准溶液；
（2）取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL标准溶液，分别加入10mL离子交换纯水中，制成浓度分别为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mg/mL的标准溶液；
（3）将标准溶液分别进样，测定峰面积，绘制标准曲线。
3. 样品测定
（1）将样品溶液进样，测定峰面积；
（2）根据标准曲线计算样品中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的含量。

七、计算
样品中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的含量分别按下式计算：
含量（mg/kg）=C×V/m
其中，C为样品中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的浓度（mg/mL），V为样品溶液的体积（mL），m为样品的质量（g）。

八、结果表示
样品中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的含量应分别报告，保留两位小数。

九、精密度和准确度
1. 精密度：在相同条件下，连续测定6次，相对标准偏差不大于5%；
2. 准确度：加入已知量的富马酸单甲酯和富马酸二甲酯标准品，回收率在90%~110%之间。

十、质量控制
1. 仪器的校准和检验应按照GB/T 6682的规定进行；
2. 样品的取样、制备和测定应按照GB/T 16819的规定进行；
3. 每批样品应同时测定空白样品和加标样品，以检查方法的准确性和灵敏度。

相关标准
GB/T 16819 植物性中药材取样方法
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格及试验方法
GB/T 20394 液相色谱法分离分析术语和定义
GB/T 20395 液相色谱法分离分析方法的验证
GB/T 20396 液相色谱法分离分析方法的应用