褐拟谷盗是一种危害严重的农业有害生物，其危害主要表现为对小麦、玉米等作物的危害。为了保护我国农业生产，防止褐拟谷盗的传播和扩散，需要对其进行检疫鉴定。本标准就是为了规范褐拟谷盗的检疫鉴定方法而制定的。

1. 范围
本标准适用于褐拟谷盗的检疫鉴定。

2. 规定
2.1 样品采集
2.1.1 样品采集时间：在小麦、玉米等作物成熟期，即籽粒开始变黄时采集。
2.1.2 样品采集方法：采用手工采集或机械采集，每个样品应包括10个以上的成熟籽粒。
2.1.3 样品保存：采集后应立即送检，如需保存，应放置在干燥通风处，避免阳光直射。

2.2 检测方法
2.2.1 样品处理：将样品放入密闭容器中，加入甲醇，摇匀后静置30分钟，取上清液进行检测。
2.2.2 检测方法：采用PCR技术进行检测，检测结果应包括阳性、阴性和不确定三种情况。
2.2.3 PCR反应条件：反应体系为25μL，反应条件为94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，72℃延伸10min，4℃保持。

2.3 结果判定
2.3.1 阳性判定：PCR反应产生明显的特异性条带，且条带强度大于对照条带强度的2倍。
2.3.2 阴性判定：PCR反应未产生特异性条带。
2.3.3 不确定判定：PCR反应产生模糊的条带或条带强度小于对照条带强度的2倍。

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