竹花叶病毒是竹类植物的一种重要病毒病害，能够引起竹类植物的叶片变黄、枯萎、死亡等症状，对竹类植物的生长和发展造成严重影响。为了防止竹花叶病毒的传播和扩散，需要对竹类植物进行检疫鉴定。本标准规定了竹花叶病毒的检疫鉴定方法，包括ELISA和RT-PCR两种方法。

1. ELISA检测法
1.1 试剂和设备
1.1.1 竹花叶病毒抗原：竹花叶病毒抗原应为纯化的抗原，或经过纯化后的组织提取液。
1.1.2 竹花叶病毒抗体：竹花叶病毒抗体应为纯化的抗体。
1.1.3 酶标仪：应符合国家标准。
1.1.4 酶标板：应为96孔酶标板。
1.1.5 洗板液：应为含Tween-20的PBS缓冲液。
1.1.6 底物：应为TMB底物。
1.1.7 停止液：应为2M H2SO4。
1.2 操作步骤
1.2.1 样品处理：将待检样品（如竹叶、竹枝等）取适量，加入PBS缓冲液中，制成10%的悬浮液。
1.2.2 酶标板涂覆：将竹花叶病毒抗原加入96孔酶标板中，孵育过夜，然后用PBS缓冲液洗涤酶标板。
1.2.3 样品孵育：将样品加入酶标板中，孵育1小时，然后用洗板液洗涤酶标板。
1.2.4 加入抗体：将竹花叶病毒抗体加入酶标板中，孵育1小时，然后用洗板液洗涤酶标板。
1.2.5 加入底物：将TMB底物加入酶标板中，孵育30分钟，然后加入停止液停止反应。
1.2.6 读板：用酶标仪读取吸光度值，计算样品的OD值。
1.3 结果判定
1.3.1 样品OD值大于阴性对照的平均值加2倍标准差，且大于0.2，则判定为阳性。
1.3.2 样品OD值小于等于阴性对照的平均值加2倍标准差，则判定为阴性。
1.3.3 样品OD值在阴性和阳性之间，则需进行重复检测。

2. RT-PCR检测法
2.1 试剂和设备
2.1.1 竹花叶病毒引物：应为特异性引物。
2.1.2 Taq DNA聚合酶：应为高纯度的Taq DNA聚合酶。
2.1.3 反应体系：应包括Taq DNA聚合酶、引物、dNTPs、MgCl2等。
2.1.4 PCR仪：应符合国家标准。
2.2 操作步骤
2.2.1 样品处理：将待检样品（如竹叶、竹枝等）取适量，加入PBS缓冲液中，制成10%的悬浮液。
2.2.2 DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取样品DNA。
2.2.3 PCR反应：将DNA样品加入PCR反应管中，加入反应体系，进行PCR反应。
2.2.4 PCR产物检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察PCR产物带型。
2.3 结果判定
2.3.1 出现特异性PCR产物带型，则判定为阳性。
2.3.2 未出现特异性PCR产物带型，则判定为阴性。

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