1.范围
本标准适用于出口粮食、饲料中尿素酶活性的测定。

2.方法原理
样品中的尿素酶作用于尿素，将其分解为氨和二氧化碳，氨与酚酞缓冲液中的酚酞反应，生成红色产物，其吸光度与尿素酶活性成正比。

3.仪器设备和试剂
3.1 仪器设备
- 分光光度计：波长范围为400~700nm，分辨率为1nm。
- 恒温水浴器：温度范围为37℃±0.5℃。
- 离心机：最高转速为3000r/min。
- 称量器：量程为0.1mg~200g。
- 恒温恒湿箱：温度范围为37℃±0.5℃，湿度为60%±5%。

3.2 试剂
- 酚酞缓冲液：将0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）中加入0.1%酚酞溶液，混合均匀。
- 尿素酶提取液：将样品加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）中，超声处理10min，离心10min，取上清液即为尿素酶提取液。
- 尿素标准溶液：浓度为1mg/mL。

4.样品处理
将样品粉碎并筛选，取适量样品称重，加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）中，超声处理10min，离心10min，取上清液即为样品提取液。

5.操作步骤
5.1 标准曲线的制备
取0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL尿素标准溶液，加入酚酞缓冲液，混合均匀，放置30min，测定吸光度，制备标准曲线。

5.2 样品测定
取样品提取液0.1mL，加入0.9mL酚酞缓冲液，混合均匀，放置30min，测定吸光度。

5.3 计算结果
根据标准曲线计算样品中尿素酶活性的含量。

6.结果表示
结果保留两位小数，单位为U/g。

7.质量控制
7.1 空白对照
在样品提取液中加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）代替样品，进行测定，作为空白对照。

7.2 标准品对照
每次测定前，应进行标准品对照实验，以检查试剂和仪器的灵敏度和准确性。

8.实验注意事项
8.1 样品的选择
样品应当代表性，避免样品中含有过多的杂质。

8.2 试剂的准备
试剂的准备应当严格按照标准要求进行，避免试剂的污染和误差。

8.3 仪器的使用
仪器的使用应当符合标准要求，避免仪器的误差和污染。

9.结果判定
样品中尿素酶活性的含量应当符合国家相关标准的要求。

相关标准
- GB/T 5490-2008 粮食、油料、饲料及其制品中尿素酶活性的测定
- GB/T 5491-2008 饲料中蛋白质的测定
- GB/T 5492-2008 饲料中粗脂肪的测定
- GB/T 5493-2008 饲料中粗纤维的测定
- GB/T 5494-2008 饲料中灰分的测定