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猴痘病毒是一种由猴痘病毒属病毒引起的疾病,主要通过接触感染传播。猴痘病毒感染后,患者会出现发热、头痛、肌肉疼痛等症状,严重时还会出现皮疹、水疱等症状。为了防止猴痘病毒的传播,需要对进出口动物、动物产品和相关环境进行检测。本标准规定了国境口岸环介导恒温扩增(LAMP)检测方法第7部分:猴痘病毒的检测原理、试剂和材料、仪器设备、操作程序、结果判定和质量控制等内容。
1 检测原理
本标准采用环介导恒温扩增技术,通过特异性引物和酶的作用,在恒温条件下扩增猴痘病毒的DNA序列,最终通过目视或荧光检测结果。
2 试剂和材料
2.1 LAMP试剂盒:包括LAMP反应混合液、LAMP酶、LAMP引物等。
2.2 样品提取试剂盒:包括样品提取缓冲液、蛋白酶K等。
2.3 猴痘病毒阳性对照品。
2.4 离心管、PCR管、移液器等。
3 仪器设备
3.1 恒温水浴或恒温器。
3.2 荧光定量PCR仪或目视检测设备。
4 操作程序
4.1 样品提取
将样品(如动物组织、血液、粪便等)加入样品提取缓冲液中,加入蛋白酶K,经过离心、加热等步骤,提取样品中的猴痘病毒DNA。
4.2 LAMP反应
将提取的样品DNA加入LAMP反应混合液中,混匀后放入恒温水浴或恒温器中进行反应,反应时间为60分钟。
4.3 结果判定
通过目视或荧光定量PCR仪观察反应管中是否出现荧光信号或目视判断是否出现白色沉淀,判断样品中是否存在猴痘病毒。
5 质量控制
5.1 试剂盒的质量控制
每批试剂盒应进行阳性对照品和阴性对照品的检测,确保试剂盒的灵敏度和特异性。
5.2 样品的质量控制
样品应按照规定的方法进行提取和处理,确保提取的DNA质量和纯度符合要求。
5.3 检测结果的质量控制
每批样品应进行重复检测,确保结果的准确性和可靠性。
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