SN/T 4675.29-2016
出口葡萄酒中酒香酵母检验 实时荧光PCR法
发布时间:2016-12-12 实施时间:2017-07-01


出口葡萄酒是我国对外贸易的重要产品之一,其质量安全问题备受关注。酒香酵母是葡萄酒中的一种重要微生物,对葡萄酒的风味和品质有着重要的影响。因此,对出口葡萄酒中酒香酵母的检验显得尤为重要。

本标准采用实时荧光PCR法进行检验。实时荧光PCR法是一种快速、准确、灵敏的检测方法,具有高度的特异性和灵敏度,能够在短时间内检测出样品中的酒香酵母。

具体操作步骤如下:

1. 样品制备

将出口葡萄酒样品取1 mL,加入1 mL的PBS缓冲液中,混匀后离心,弃上清液,留下沉淀。

2. DNA提取

将沉淀加入200 μL的提取液中,混匀后加入20 μL的蛋白酶K,65℃水浴孵育30 min,离心收集上清液,加入等体积的异丙醇,混匀后离心,弃上清液,留下沉淀。将沉淀用70%的乙醇洗涤,离心后弃上清液,将沉淀干燥后加入50 μL的去离子水中,混匀后离心,收集上清液,即为DNA提取液。

3. PCR扩增

将DNA提取液加入PCR反应管中,加入PCR试剂盒中的PCR反应体系,进行PCR扩增。PCR反应条件为:95℃预变性5 min,95℃变性15 s,60℃退火30 s,72℃延伸30 s,共40个循环。PCR反应结束后,进行荧光信号检测。

4. 数据分析

根据荧光信号的强度和阈值,判断样品中是否存在酒香酵母。如果荧光信号强度高于阈值,则判断样品中存在酒香酵母;如果荧光信号强度低于阈值,则判断样品中不存在酒香酵母。

相关标准:
GB/T 15038-2017 葡萄酒中酵母菌检验方法
GB/T 15039-2017 葡萄酒中乳酸菌检验方法
GB/T 15040-2017 葡萄酒中酸度检验方法
GB/T 15041-2017 葡萄酒中总酚检验方法
GB/T 15042-2017 葡萄酒中总糖检验方法