水仙普通潜隐病毒是一种常见的水仙病毒，能够引起水仙的叶片变黄、变褐、变枯等症状，严重影响水仙的生长和观赏价值。为了防止水仙普通潜隐病毒的传播和扩散，需要对水仙进行检疫鉴定。本标准规定了水仙普通潜隐病毒的检疫鉴定方法，以确保水仙的健康和质量。

1.样品采集
样品采集应在水仙生长期间进行，采集叶片、花茎、花蕾等部位，避免采集受损或病变的组织。采集后应立即送检，或在4℃下保存，不得超过24小时。

2.ELISA检测
ELISA检测是一种常用的病毒检测方法，可以快速、准确地检测水仙普通潜隐病毒。具体操作步骤如下：

（1）将样品切碎，加入适量的PBS缓冲液，制成10%的悬浮液；
（2）将悬浮液离心，取上清液；
（3）将上清液加入包被有水仙普通潜隐病毒抗原的96孔板中，孵育1小时；
（4）将孵育后的孔板洗涤干净，加入包被有水仙普通潜隐病毒抗体的酶标记二抗，孵育1小时；
（5）将孵育后的孔板洗涤干净，加入底物，孵育30分钟；
（6）加入停止液，测定吸光度值。

ELISA检测结果的判定标准为：吸光度值大于0.2为阳性，小于0.2为阴性。

3.RT-PCR检测
RT-PCR检测是一种高灵敏度、高特异性的病毒检测方法，可以检测到极低浓度的病毒。具体操作步骤如下：

（1）将样品切碎，加入适量的RNA提取试剂，提取RNA；
（2）将提取的RNA进行逆转录，合成cDNA；
（3）将合成的cDNA进行PCR扩增，使用水仙普通潜隐病毒特异性引物；
（4）将PCR产物进行凝胶电泳，观察是否有目标条带。

RT-PCR检测结果的判定标准为：出现目标条带为阳性，未出现目标条带为阴性。

4.结果判定
ELISA和RT-PCR检测结果应综合判定，两种方法均为阴性时，样品为阴性；两种方法均为阳性时，样品为阳性；两种方法结果不一致时，应进行重复检测或使用其他检测方法进行确认。

相关标准
GB/T 31722-2015 植物检疫技术术语
GB/T 31723-2015 植物检疫规程
GB/T 31724-2015 植物检疫标本采集、处理和保存规范
GB/T 31725-2015 植物检疫病原体检测方法
GB/T 31726-2015 植物检疫病害鉴定方法