DNA提取是分子生物学研究的基础,而对于陈旧昆虫标本的DNA提取则更具有挑战性。陈旧昆虫标本中DNA的质量和数量都受到很大的限制,因此需要一种高效、可靠的DNA提取方法。本标准介绍了一种基于磁珠的DNA提取方法,可以有效地提取陈旧昆虫标本中的DNA。
1.范围
本标准适用于陈旧昆虫标本的DNA提取磁珠方法。
2.方法
2.1 样本处理
将陈旧昆虫标本取出,去除外壳和肌肉组织,留下头部和胸部。将头部和胸部放入1.5mL离心管中,加入500μL的提取缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。
2.2 DNA提取
加入磁珠,用磁珠悬浮液混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。加入洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。重复洗涤步骤,直到洗涤液中不再有明显的颜色。最后加入洗涤缓冲液,离心1min,将上清转移到新的离心管中。加入洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。加入洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。加入洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。最后加入洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。
2.3 DNA溶解
加入适量的洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。加入适量的洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。最后加入适量的洗涤缓冲液,用匀浆器均匀混合,离心1min,将上清转移到新的离心管中。
3.结果计算
将DNA样品用琼脂糖凝胶电泳进行检测,根据DNA条带的大小和清晰度来判断DNA的质量和数量。
相关标准
GB/T 21415-2008 昆虫标本制备方法
GB/T 21416-2008 昆虫标本保存方法
GB/T 21417-2008 昆虫标本鉴定方法
GB/T 21418-2008 昆虫标本分类方法
GB/T 21419-2008 昆虫标本标签制作方法