香蕉枯萎病是由香蕉枯萎病菌引起的一种严重的病害，对香蕉产业造成了很大的危害。为了防止香蕉枯萎病的传播，需要对香蕉枯萎病菌进行检疫鉴定。本标准规定了香蕉枯萎病菌生理小种检疫鉴定的方法。

1 范围
本标准适用于香蕉枯萎病菌生理小种检疫鉴定。

2 原材料和试剂
2.1 原材料
香蕉枯萎病菌生理小种。

2.2 试剂
2.2.1 磷酸盐缓冲液（PBS）：NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4 1.44 g，KH2PO4 0.24 g，加入1 L蒸馏水中，pH 7.2。
2.2.2 甲醇：纯度为99.5%。
2.2.3 乙醇：纯度为95%。
2.2.4 无水乙醇：纯度为100%。
2.2.5 甲苯：纯度为99.5%。
2.2.6 氯仿：纯度为99.5%。
2.2.7 丙酮：纯度为99.5%。
2.2.8 乙酸乙酯：纯度为99.5%。
2.2.9 氯化钠（NaCl）：纯度为99.5%。
2.2.10 氯化钾（KCl）：纯度为99.5%。
2.2.11 磷酸二氢钾（KH2PO4）：纯度为99.5%。
2.2.12 磷酸二钠（Na2HPO4）：纯度为99.5%。
2.2.13 碳酸钠（Na2CO3）：纯度为99.5%。
2.2.14 氢氧化钠（NaOH）：纯度为99.5%。
2.2.15 氢氧化钾（KOH）：纯度为99.5%。
2.2.16 硫酸铵（NH4SO4）：纯度为99.5%。
2.2.17 硫酸铜（CuSO4）：纯度为99.5%。
2.2.18 硫酸锌（ZnSO4）：纯度为99.5%。
2.2.19 硫酸镁（MgSO4）：纯度为99.5%。
2.2.20 硫酸钙（CaSO4）：纯度为99.5%。
2.2.21 硫酸铁（FeSO4）：纯度为99.5%。
2.2.22 硫酸钠（Na2SO4）：纯度为99.5%。
2.2.23 硝酸钠（NaNO3）：纯度为99.5%。
2.2.24 硝酸铵（NH4NO3）：纯度为99.5%。
2.2.25 硝酸钙（Ca(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.26 硝酸钾（KNO3）：纯度为99.5%。
2.2.27 硝酸铁（Fe(NO3)3）：纯度为99.5%。
2.2.28 硝酸铜（Cu(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.29 硝酸锌（Zn(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.30 硝酸镁（Mg(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.31 硝酸银（AgNO3）：纯度为99.5%。
2.2.32 硝酸汞（Hg(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.33 硝酸铅（Pb(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.34 硝酸钴（Co(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.35 硝酸镍（Ni(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.36 硝酸锰（Mn(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.37 硝酸钡（Ba(NO3)2）：纯度为99.5%。
2.2.38 硝酸铝（Al(NO3)3）：纯度为99.5%。
2.2.39 硝酸钠-硝酸银指示剂：硝酸钠 0.1 g，硝酸银 0.1 g，加入100 mL蒸馏水中，过滤，取滤液。

3 仪器设备
3.1 常规实验室设备。
3.2 离心机。
3.3 恒温培养箱。
3.4 显微镜。

4 方法
4.1 样品处理
将香蕉枯萎病菌生理小种接种在香蕉幼苗上，培养至病斑形成后，用无菌PBS洗涤病斑表面，用无菌PBS悬浮菌体，离心沉淀，去除上清液，用无菌PBS重悬沉淀，制备菌液。

4.2 生理小种鉴定
4.2.1 碳源利用试验
将香蕉枯萎病菌生理小种接种在含有不同碳源的培养基上，培养一定时间后观察生长情况，根据生长情况判断生理小种类型。
4.2.2 氮源利用试验
将香蕉枯萎病菌生理小种接种在含有不同氮源的培养基上，培养一定时间后观察生长情况，根据生长情况判断生理小种类型。
4.2.3 生长温度试验
将香蕉枯萎病菌生理小种接种在不同温度下的培养基上，培养一定时间后观察生长情况，根据生长情况判断生理小种类型。
4.2.4 生长速度试验
将香蕉枯萎病菌生理小种接种在含有不同浓度的培养基上，培养一定时间后观察生长情况，根据生长情况判断生理小种类型。

5 结果判定
根据生理小种鉴定试验结果，判断香蕉枯萎病菌生理小种类型。

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