一、范围
本标准规定了进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法。

本标准适用于进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测。

二、检测原理
样品经提取后，采用高效液相色谱法（HPLC）分离，紫外检测器检测，外标法定量。

三、仪器设备和试剂
1.高效液相色谱仪：包括泵、自动进样器、紫外检测器等。
2.色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
3.移液器：1ml、5ml、10ml、20ml、50ml。
4.量筒：10ml、50ml。
5.离心机。
6.超声波清洗器。
7.试剂：甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸乙酯（色谱纯）、正己烷（色谱纯）、角黄素、虾青素。

四、样品的处理
1.样品的准备
取样品10g，加入50ml甲醇，超声波处理30min，离心10min，取上清液过滤，取10ml上清液加入50ml正己烷，振荡1min，离心10min，取上清液过滤，取5ml上清液加入5ml乙酸乙酯，振荡1min，离心10min，取上清液过滤，取2ml上清液加入2ml乙腈，振荡1min，离心10min，取上清液过滤，即为待测样品。

2.标准品的准备
取角黄素、虾青素标准品各0.1mg，分别加入10ml甲醇中，摇匀，即为1mg/ml的标准溶液。取1ml标准溶液加入10ml甲醇中，摇匀，即为0.1mg/ml的标准溶液。取1ml标准溶液加入10ml甲醇中，摇匀，即为0.01mg/ml的标准溶液。取1ml标准溶液加入10ml甲醇中，摇匀，即为0.001mg/ml的标准溶液。

五、操作步骤
1.仪器的条件设置
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：450nm。

2.进样
取待测样品2ml，加入2ml甲醇中，摇匀，离心10min，取上清液进样。

3.建立标准曲线
取0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml的角黄素、虾青素标准溶液各1ml，加入10ml甲醇中，摇匀，进样，建立标准曲线。

4.样品的检测
取待测样品2ml，加入2ml甲醇中，摇匀，离心10min，取上清液进样，测定角黄素、虾青素的含量。

六、计算
样品中角黄素、虾青素的含量，按下式计算：
C=（A-B）/a×V/m
式中：
C——样品中角黄素、虾青素的含量，mg/kg；
A——待测样品峰面积；
B——空白样品峰面积；
a——标准曲线斜率；
V——进样体积，ml；
m——样品质量，g。

七、结果的表达
样品中角黄素、虾青素的含量，保留两位小数，单位为mg/kg。

八、质量控制
1.标准品的制备应按照本标准的规定进行。
2.每个批次样品应设置空白样品和加标样品，进行质量控制。
3.每个批次样品应重复检测3次，取平均值作为最终结果。

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