小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种常见的食源性病原菌，能够引起人类肠道感染，严重时会导致肠道出血、肠穿孔等症状。为了保障出口食品的质量安全，需要对其中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检验。本标准就是为了规范出口食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验方法而制定的。

1 范围
本标准适用于出口食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。

2 原理
样品经过预处理后，采用PCR技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性基因。

3 试剂和材料
3.1 试剂
PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、琼脂糖、TAE缓冲液、蒸馏水等。

3.2 材料
PCR仪、电泳仪、离心管、PCR管、显微镜等。

4 仪器和设备
PCR仪、电泳仪、离心机、移液器、显微镜等。

5 样品的处理
5.1 样品的采集
样品应在出口前进行采集，采集时应注意避免污染。

5.2 样品的处理
样品经过预处理后，提取DNA。

6 PCR反应
6.1 PCR反应体系
PCR反应体系如下表所示：

试剂 | 体积（μL）
---|---
PCR试剂盒 | 12.5
DNA提取物 | 2.5
蒸馏水 | 10

6.2 PCR反应条件
PCR反应条件如下表所示：

步骤 | 温度（℃） | 时间（min）
---|---|---
预变性 | 95 | 5
变性 | 95 | 30
退火 | 55 | 30
延伸 | 72 | 30
最终延伸 | 72 | 10

7 电泳分析
将PCR产物进行电泳分析，检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性基因。

8 结果判定
8.1 阳性对照
阳性对照应呈现出特异性条带。

8.2 阴性对照
阴性对照不应呈现出特异性条带。

8.3 样品结果判定
样品中出现特异性条带，即为阳性；未出现特异性条带，即为阴性。

9 结果报告
报告应包括样品编号、检测结果、检测方法、检测日期等信息。

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