熊果苷是一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于植物中，如葡萄、蓝莓、黑莓、草莓、覆盆子等水果中。熊果苷具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，因此备受关注。出口果汁中熊果苷的含量是衡量果汁品质的重要指标之一。本标准旨在规定出口果汁中熊果苷的测定方法，以保证出口果汁的质量和安全。

1.范围
本标准适用于出口果汁中熊果苷的测定。

2.原理
样品经过提取、净化、浓缩后，用高效液相色谱法（HPLC）测定熊果苷的含量。

3.仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪
3.2 恒温振荡器
3.3 离心机
3.4pH计
3.5 电子天平
3.6 紫外可见分光光度计

4.试剂和材料
4.1 甲醇
4.2 乙腈
4.3 磷酸二氢钾
4.4 磷酸氢二钠
4.5 纯水
4.6 熊果苷标准品

5.样品的制备
5.1 样品的准备
将样品取适量，加入磷酸二氢钾溶液，pH值调节至4.0-4.5，加入甲醇和乙腈混合溶液，振荡提取，离心分离，取上清液，用氮气吹干，加入纯水溶解，过滤，取滤液备用。
5.2 样品的浓缩
将样品滤液用恒温振荡器浓缩至一定体积，加入纯水调节体积，过滤，取滤液备用。

6.操作步骤
6.1 仪器的准备
开机预热，调节流速，检查仪器的运行状态。
6.2 样品的进样
将样品注入进样器，设定进样量和进样速度。
6.3 色谱条件的设置
设置流动相的组成和流速，设定柱温和检测波长。
6.4 样品的分离
将样品注入色谱柱，进行分离。
6.5 数据的处理
用紫外可见分光光度计检测熊果苷的峰面积，与标准曲线比较，计算出熊果苷的含量。

7.结果的计算
样品中熊果苷的含量，按下式计算：
C=（A×V×D）/（ε×m）
其中，C为熊果苷的含量（mg/L），A为熊果苷的峰面积，V为样品的体积（mL），D为稀释倍数，ε为熊果苷的摩尔吸光系数，m为样品的质量（g）。

8.精密度和准确度
8.1 精密度
在同一天内，重复测定6次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于5%。
8.2 准确度
加入已知浓度的熊果苷标准品，进行回收率实验，回收率应在95%~105%之间。

9.质量控制
9.1 样品的平行测定
对同一样品进行平行测定，计算平均值。
9.2 标准曲线的制备
用熊果苷标准品制备标准曲线，检查标准曲线的线性和相关系数。
9.3 空白对照
用纯水代替样品进行测定，检查是否有干扰峰。

相关标准
GB/T 5009.124-2003 食品中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.229-2016 食品中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.28-2017 食品中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.33-2017 食品中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.35-2017 食品中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法