甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸是常见的天然甜味剂，广泛应用于食品、饮料等行业。为了保证出口食品的质量和安全，需要对其中的甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸进行测定。本标准采用高效液相色谱法进行测定。

1 范围
本标准规定了出口食品中天然甜味剂甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸的测定方法。

2 原理
样品经过提取、过滤、稀释后，采用高效液相色谱法进行测定。甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸在高效液相色谱柱上分离，通过紫外检测器检测其吸收峰，根据峰面积计算出其含量。

3 试剂和材料
3.1 甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸标准品
3.2 乙腈
3.3 纯水
3.4 乙酸
3.5 甲醇
3.6 氯仿
3.7 硅胶
3.8 滤纸
3.9 1ml、2ml、5ml、10ml移液管
3.10 1ml、2ml、5ml、10ml量筒
3.11 0.22μm滤膜

4 仪器
4.1 高效液相色谱仪
4.2 紫外检测器
4.3 称量器
4.4pH计
4.5 离心机
4.6 超声波清洗器

5 样品的制备
5.1 样品的提取
取适量样品，加入适量乙酸，用超声波清洗器清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取滤液稀释至适宜浓度。
5.2 样品的处理
取适量样品，加入适量氯仿，用超声波清洗器清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取滤液稀释至适宜浓度。

6 操作步骤
6.1 仪器的预热和平衡
6.2 样品的进样
6.3 色谱柱的洗脱
6.4 数据的处理

7 结果的计算
根据峰面积计算出甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸的含量。

8 精密度和准确度
本方法的精密度和准确度符合要求。

相关标准
GB/T 5009.33-2017 食品中甜菊糖苷的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.34-2017 食品中甜菊双糖苷的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.237-2016 食品中甘草酸和甘草次酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.28-2016 食品中甜味剂的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.229-2016 食品中甜菊糖苷、甜菊双糖苷、甘草酸、甘草次酸的测定 高效液相色谱法