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一、范围
本标准适用于出口动物源食品中多种米尔贝霉素残留量的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 5009.124 食品中多环芳烃的测定 高效液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.156 食品中氯霉素、米诺霉素、米力贝霉素、土霉素、磺胺类药物和甲氧苄啶的测定 高效液相色谱-串联质谱法
GB/T 20394.1 食品中兽药残留分析方法 第1部分：总则
GB/T 20394.2 食品中兽药残留分析方法 第2部分：高效液相色谱法

三、原理
样品经提取、净化后，采用液相色谱-质谱/质谱法进行测定。

四、仪器设备和试剂
4.1 仪器设备
液相色谱-质谱/质谱仪：具有电喷雾离子源、质谱分析器和色谱柱等部件。
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
移液器：1mL、5mL、10mL、20mL、50mL。
超声波清洗器：功率大于300W。
4.2 试剂
甲醇：色谱纯。
乙腈：色谱纯。
水：色谱纯。
乙酸：纯。
米尔贝霉素标准品：纯度大于98%。
米尔贝霉素内标品：纯度大于98%。
氯仿：色谱纯。
硫酸钠：分析纯。
硫酸铵：分析纯。
乙酸乙酯：色谱纯。
乙酸乙酯-氯仿（1:1，V/V）：色谱纯。

五、样品处理
5.1 样品的准备
样品应当按照GB/T 20394.1的规定进行采样和处理。
5.2 样品的提取
取样品10g，加入50mL甲醇-水（8:2，V/V）混合溶液中，超声提取30min，离心10min，取上清液过滤，取2mL上清液加入10mL离心管中，加入2mL氯仿，振荡1min，离心5min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL离心管中，加入2mL硫酸钠溶液（10%，质量分数），振荡1min，离心5min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL离心管中，加入2mL硫酸铵溶液（10%，质量分数），振荡1min，离心5min，取上清液过滤，取1mL上清液加入10mL离心管中，加入2mL乙酸乙酯，振荡1min，离心5min，取上清液过滤，取1mL上清液加入2mL离心管中，加入2mL乙酸乙酯-氯仿（1:1，V/V），振荡1min，离心5min，取上清液过滤，取1mL上清液进入液相色谱-质谱/质谱仪进行测定。
5.3 样品的净化
取上清液1mL，加入C18 SPE柱中，用5mL甲醇-水（8:2，V/V）洗脱，用5mL甲醇洗脱，用5mL乙腈洗脱，用5mL乙酸乙酯洗脱，用5mL乙酸乙酯-氯仿（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，用氮气吹干，加入1mL甲醇中溶解，进行液相色谱-质谱/质谱分析。

六、操作步骤
6.1 仪器条件
详见表1。

表1 仪器条件

6.2 标准曲线的制备
取不同浓度的米尔贝霉素标准品，加入样品中，进行提取、净化和分析，得到峰面积与浓度的线性关系，制备标准曲线。

6.3 样品的测定
取经过提取和净化的样品，进行液相色谱-质谱/质谱分析，得到峰面积，根据标准曲线计算出样品中米尔贝霉素的含量。

七、结果计算与报告
7.1 计算
样品中米尔贝霉素的含量（mg/kg）=（样品中米尔贝霉素峰面积/米尔贝霉素内标峰面积）×（内标加标回收率/加标量）×（标准品浓度/样品质量）×10^3
其中，内标加标回收率为80%~120%。

7.2 报告
报告样品中米尔贝霉素的含量，保留两位小数。

八、精密度和准确度
8.1 精密度
在相同条件下，重复测定6次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于15%。

8.2 准确度
在不同浓度下，进行加标回收实验，加标量应当在0.01~0.1mg/kg之间，加标回收率应当在80%~120%之间。

九、质量控制
9.1 仪器空白
在相同条件下，进行5次测定，计算平均值，空白值不应大于方法检出限的1/10。

9.2 样品空白
在相同条件下，进行5次测定，计算平均值，样品空白值不应大于方法检出限的1/10。

9.3 加标回收率
在不同浓度下，进行加标回收实验，加标量应当在0.01~0.1mg/kg之间，加标回收率应当在80%~120%之间。

十、方法检出限和限定标准
10.1 方法检出限
方法检出限为0.01mg/kg。

10.2 限定标准
出口动物源食品中米尔贝霉素的限定标准为0.1mg/kg。

相关标准：
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 5009.124 食品中多环芳烃的测定 高效液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.156 食品中氯霉素、米诺霉素、米力贝霉素、土霉素、磺胺类药物和甲氧苄啶的测定 高效液相色谱-串联质谱法
GB/T 20394.1 食品中兽药残留分析方法 第1部分：总则
GB/T 20394.2 食品中兽药残留分析方法 第2部分：高效液相色谱法