一、范围
本标准适用于出口保健食品中水飞蓟宾的测定。

二、引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 20394-2006 食品中农药最大残留限量
GB/T 22220-2008 食品中农药残留量的测定 高效液相色谱法
GB/T 22388.1-2008 食品中农药残留量的测定 气相色谱法
GB/T 22388.2-2008 食品中农药残留量的测定 液相色谱法

三、原理
样品经乙腈提取，经过净化后，采用高效液相色谱法进行测定。

四、仪器设备和试剂
4.1 仪器设备
高效液相色谱仪、色谱柱、色谱柱保护器、分液器、注射器、紫外检测器等。
4.2 试剂
乙腈、水飞蓟宾标准品、乙酸乙酯、氯仿、硅胶等。

五、样品处理
5.1 样品的准备
将样品称取适量，加入适量的乙腈，超声提取，离心后取上清液。
5.2 样品的净化
将上清液经过硅胶柱净化，用乙酸乙酯-氯仿（1:1）混合液洗脱，收集洗脱液，浓缩至干燥，加入适量的乙腈溶解，过滤后即可进样。

六、操作步骤
6.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）
流动相：甲醇-水（70:30）
流速：1.0mL/min
检测波长：230nm
进样量：20μL
柱温：30℃
6.2 样品的测定
将样品进样，记录峰面积，根据标准曲线计算出水飞蓟宾的含量。

七、计算方法
样品中水飞蓟宾的含量，按下式计算：
C=（A×V×D）/（a×m）
式中：
C——样品中水飞蓟宾的含量，mg/kg；
A——样品中水飞蓟宾的峰面积；
V——乙腈溶液体积，mL；
D——乙腈提取液的稀释倍数；
a——标准品的质量浓度，mg/mL；
m——样品质量，g。

八、质量控制
8.1 标准曲线的制备
取水飞蓟宾标准品，按不同浓度分别制备标准溶液，进样测定，绘制标准曲线。
8.2 方法的精密度和准确度
在同一实验室内，采用本方法对同一样品进行测定，测定结果的相对标准偏差不应大于10%。
8.3 方法的重复性
在同一实验室内，采用本方法对同一样品进行测定，测定结果的相对标准偏差不应大于15%。
8.4 加标回收实验
在样品中加入已知量的水飞蓟宾标准品，进行提取、净化和测定，计算加标回收率，回收率应在80%~120%之间。

九、报告
报告中应包括以下内容：
9.1 样品的名称、编号、来源、采样日期等；
9.2 分析方法的名称、编号、日期等；
9.3 样品的处理方法；
9.4 测定结果，包括水飞蓟宾的含量、相对标准偏差等；
9.5 质量控制结果；
9.6 分析人员的签名。

相关标准
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