微囊藻毒素是一种由蓝藻属微囊藻产生的毒素，对人体和动物的肝脏、肾脏、神经系统等器官有较强的毒性作用。水产品中微囊藻毒素的含量是衡量水产品安全性的重要指标之一。本标准旨在规定出口水产品中微囊藻毒素的检测方法，以保障出口水产品的质量和安全。

1.范围
本标准适用于出口水产品中微囊藻毒素的检测。

2.仪器和设备
2.1 液相色谱-质谱/质谱仪
2.2 恒温振荡器
2.3 离心机
2.4 超声波清洗仪
2.5 电子天平
2.6 称量瓶、移液管、滤膜等

3.试剂和材料
3.1 甲醇
3.2 乙腈
3.3 纯水
3.4 乙酸
3.5 乙酸乙酯
3.6 氨水
3.7 氯仿
3.8 硅胶管
3.9 微孔过滤膜
3.10 微囊藻毒素标准品

4.样品处理
4.1 取样品10g，加入50mL甲醇，用恒温振荡器振荡30min。
4.2 离心10min，取上清液过滤，滤膜孔径为0.22μm。
4.3 取上清液10mL，加入10mL乙腈，用超声波清洗仪清洗5min。
4.4 离心10min，取上清液过滤，滤膜孔径为0.22μm。

5.检测方法
5.1 仪器条件
5.1.1 柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（2.1mm×50mm，1.8μm）
5.1.2 流动相A：0.1%乙酸水溶液
5.1.3 流动相B：乙腈
5.1.4 梯度洗脱程序：0-1min，5% B；1-3min，5%-95% B；3-4min，95% B；4-4.1min，95%-5% B；4.1-5min，5% B
5.1.5 流速：0.3mL/min
5.1.6 进样量：5μL
5.1.7 柱温：40℃
5.1.8 质谱条件：电喷雾离子源（ESI），正离子模式，多反应监测（MRM）模式
5.1.9 离子转移反应：微囊藻毒素-LR（m/z 995.6→1077.6）、微囊藻毒素-RR（m/z 1029.6→1111.6）、微囊藻毒素-YR（m/z 1033.6→1115.6）
5.2 检测步骤
5.2.1 将样品注入液相色谱-质谱/质谱仪中进行检测。
5.2.2 用微囊藻毒素标准品制备标准曲线，计算样品中微囊藻毒素的含量。

6.结果计算
6.1 标准曲线的制备
6.1.1 取微囊藻毒素标准品0.1mg/mL，用甲醇稀释得到不同浓度的标准品溶液。
6.1.2 用液相色谱-质谱/质谱仪检测标准品溶液，绘制微囊藻毒素标准曲线。
6.2 样品中微囊藻毒素的含量计算
6.2.1 用液相色谱-质谱/质谱仪检测样品，得到微囊藻毒素的峰面积。
6.2.2 根据标准曲线计算样品中微囊藻毒素的含量。

7.质量控制
7.1 样品的处理和检测应在无微囊藻毒素污染的条件下进行。
7.2 每个批次样品应设置空白样品和微囊藻毒素标准品，进行质量控制。
7.3 每个批次样品应进行平行检测，计算平均值和相对标准偏差。

相关标准
GB 5009.156-2016 食品中微囊藻毒素的测定 液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 23522-2009 水生生物毒素的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 5009.212-2017 食品中微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-RR和微囊藻毒素-YR的测定 液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 5009.213-2017 食品中微囊藻毒素-LR的测定 液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.214-2017 食品中微囊藻毒素-RR的测定 液相色谱-荧光检测法