SN/T 4675.30-2017
出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验 SYBR Green I荧光PCR法
发布时间:2017-05-12 实施时间:2017-12-01


拜氏接合酵母是一种常见的酿酒酵母,可以在葡萄酒中发酵产生乙醇和二氧化碳。但是,如果葡萄酒中的拜氏接合酵母数量过多,会影响葡萄酒的品质和稳定性。因此,对于出口葡萄酒中的拜氏接合酵母进行检验是非常必要的。

本标准采用SYBR Green I荧光PCR法进行检验。SYBR Green I是一种荧光染料,可以与DNA结合并发出荧光信号。通过PCR扩增葡萄酒中的DNA,再加入SYBR Green I染料,可以检测出葡萄酒中的拜氏接合酵母数量。

具体操作步骤如下:

1. 样品制备:取出口葡萄酒样品10 mL,加入50 μL的10% NaCl溶液,混匀后离心,取上清液备用。

2. DNA提取:将上清液加入离心管中,离心10 min,弃去上清液,加入200 μL的DNA提取液,混匀后加入0.5 g的玻璃珠,用高速震荡器震荡2 min,然后在65℃水浴中孵育30 min,离心10 min,取上清液备用。

3. PCR扩增:将提取的DNA加入PCR反应管中,加入引物和SYBR Green I染料,进行PCR扩增。PCR反应条件为:95℃预变性5 min,95℃变性30 s,58℃退火30 s,72℃延伸30 s,共循环40次。

4. 荧光检测:在PCR扩增过程中,SYBR Green I染料会与扩增产物结合并发出荧光信号。通过荧光检测仪检测荧光信号强度,可以计算出葡萄酒中的拜氏接合酵母数量。

本标准的检验结果应该符合以下要求:

1. 检出限:本方法的检出限为10 CFU/mL。

2. 精密度:同一实验室内,本方法的精密度应该满足相对标准偏差不大于10%的要求。

3. 准确度:本方法的准确度应该满足相对误差不大于10%的要求。

4. 重复性:不同实验室之间,本方法的重复性应该满足相对标准偏差不大于15%的要求。

相关标准:
GB/T 15038-2017 葡萄酒中酵母菌和乳酸菌的检验方法
GB/T 15039-2017 葡萄酒中酵母菌数量的测定
GB/T 15040-2017 葡萄酒中乳酸菌数量的测定
GB/T 15041-2017 葡萄酒中酵母菌和乳酸菌的鉴定
GB/T 15042-2017 葡萄酒中酵母菌和乳酸菌的计数