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腐败酵母菌是一种常见的微生物，它们可以在食品中生长繁殖，导致食品变质。因此，在出口食品中检测腐败酵母菌是非常重要的。本标准提供了一种实时荧光PCR检测方法，可以快速、准确地检测出口食品中的腐败酵母菌。

1.范围
本标准适用于出口食品中腐败酵母菌的检测。

2.试剂和材料
2.1 试剂
2.1.1 DNA提取试剂盒
2.1.2 实时荧光PCR试剂盒
2.1.3 腐败酵母菌特异性引物和探针
2.2 材料
2.2.1 10μL、200μL、1000μL微量移液器
2.2.2 PCR管
2.2.3 PCR板
2.2.4 PCR仪

3.方法
3.1 样品处理
将样品取1g，加入10mL生理盐水中，振荡混合，制备10倍稀释液。
3.2 DNA提取
按照DNA提取试剂盒说明书进行操作，提取样品DNA。
3.3 实时荧光PCR检测
按照实时荧光PCR试剂盒说明书进行操作，进行PCR反应。PCR反应条件如下：
预变性：95℃，5min
PCR循环：95℃，10s；60℃，30s；72℃，30s，共40个循环
3.4 数据分析
根据实时荧光PCR仪的结果，判断样品中是否存在腐败酵母菌。

4.结果判定
4.1 阳性判定
当样品的荧光曲线与阳性对照荧光曲线相同或相似时，判定为阳性。
4.2 阴性判定
当样品的荧光曲线与阴性对照荧光曲线相同或相似时，判定为阴性。

相关标准：
GB/T 4789.15-2016 食品微生物学检验 腐败酵母菌的检验
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和说明
GB/T 5009.3-2016 食品中铅的测定
GB/T 5009.4-2016 食品中砷的测定