检疫性轮枝菌是一种常见的植物病原菌，能够引起多种植物病害，如烟草青枯病、番茄斑点病等。为了保障植物健康和农业生产，需要对植物及其制品进行检疫，及时发现和防控检疫性轮枝菌的传播。本标准旨在规定一种基于基因条形码的检疫性轮枝菌筛查方法，以提高检测效率和准确性。

1.范围
本标准适用于检疫性轮枝菌的检测。

2.引用文件
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价方法的通用要求
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和说明的通用规定
GB/T 2828.1-2012 采样检验程序 第1部分：按计划采样程序
GB/T 2829-2002 采样检验程序 抽样表的制定和使用
GB/T 29415-2013 生物技术术语 基因组学
SN/T 4877.1-2017 基因条形码筛查方法 第1部分：总则
SN/T 4877.2-2017 基因条形码筛查方法 第2部分：检疫性真菌
SN/T 4877.3-2017 基因条形码筛查方法 第3部分：检疫性细菌
SN/T 4877.4-2017 基因条形码筛查方法 第4部分：检疫性病毒
SN/T 4877.5-2017 基因条形码筛查方法 第5部分：检疫性线虫
SN/T 4877.6-2017 基因条形码筛查方法 第6部分：检疫性昆虫

3.术语和定义
3.1 基因条形码
基因条形码是指通过对物种特异性基因进行PCR扩增和测序，获得的一段特异性序列，用于物种鉴定和分类。

3.2 检疫性轮枝菌
检疫性轮枝菌是指能够引起植物病害的一类细菌，包括但不限于烟草青枯病菌、番茄斑点病菌等。

4.原理
本方法基于基因条形码技术，通过PCR扩增和测序检测样品中的检疫性轮枝菌特异性基因序列，利用基因条形码数据库进行比对和鉴定，从而实现对检疫性轮枝菌的筛查。

5.仪器和设备
5.1 PCR仪
5.2 DNA纯化仪
5.3 DNA浓度计
5.4 电泳仪
5.5 紫外分光光度计
5.6 计算机

6.试剂和材料
6.1 PCR试剂盒
6.2 DNA纯化试剂盒
6.3 DNA Marker
6.4 紫外吸收试剂
6.5 离心管
6.6 PCR管
6.7 筛网
6.8 无菌吸管
6.9 无菌移液器
6.10 无菌移液器头
6.11 无菌操作台
6.12 无菌手套

7.样品处理
7.1 样品采集
根据GB/T 2828.1-2012和GB/T 2829-2002的要求进行样品采集和处理。

7.2 样品处理
将样品进行粉碎或切碎，取适量样品加入离心管中，加入适量的PBS缓冲液，混匀后离心，取上清液作为样品。

8.操作步骤
8.1 DNA提取
按照DNA纯化试剂盒说明书进行DNA提取。

8.2 PCR扩增
按照PCR试剂盒说明书进行PCR扩增。

8.3 PCR产物纯化
按照DNA纯化试剂盒说明书进行PCR产物纯化。

8.4 DNA定量
使用DNA浓度计对纯化后的DNA进行定量。

8.5 测序
将纯化后的PCR产物送至测序公司进行测序。

8.6 数据分析
将测序结果与基因条形码数据库进行比对和鉴定，确定样品中的检疫性轮枝菌种类。

9.结果判定
9.1 阳性判定
样品中检测到特异性PCR产物，且测序结果与基因条形码数据库比对一致，判定为阳性。

9.2 阴性判定
样品中未检测到特异性PCR产物，或者检测到PCR产物但测序结果与基因条形码数据库比对不一致，判定为阴性。

10.质量控制
10.1 采用质控样品进行质量控制。
10.2 采用阳性对照和阴性对照进行质量控制。

相关标准
SN/T 4877.1-2017 基因条形码筛查方法 第1部分：总则
SN/T 4877.2-2017 基因条形码筛查方法 第2部分：检疫性真菌
SN/T 4877.3-2017 基因条形码筛查方法 第3部分：检疫性细菌
SN/T 4877.4-2017 基因条形码筛查方法 第4部分：检疫性病毒
SN/T 4877.5-2017 基因条形码筛查方法 第5部分：检疫性线虫