葡萄金黄化植原体是一种严重危害葡萄生产的病原体，能引起葡萄叶片黄化、萎缩、果实变小、产量降低等症状。为了保障葡萄生产的安全，需要对葡萄金黄化植原体进行检疫鉴定。本标准旨在规定葡萄金黄化植原体检疫鉴定方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。

1 范围
本标准适用于葡萄金黄化植原体检疫鉴定。

2 规定
2.1 样品采集
2.1.1 样品采集时间
葡萄金黄化植原体检疫鉴定的样品采集时间为葡萄生长期间，以葡萄叶片为主要样品。

2.1.2 样品采集方法
样品采集时，应选择病叶、健叶各半的葡萄叶片，避免采集病叶过多，影响检测结果。采集的样品应立即放入密闭袋中，避免样品受到污染。

2.2 样品处理
2.2.1 样品处理方法
样品处理时，应将采集的葡萄叶片放入离心管中，加入适量的PBS缓冲液，用超声波处理器处理，使细胞破裂，释放出DNA。

2.2.2 样品处理条件
样品处理条件为：超声波处理器功率为200W，处理时间为5min。

2.3 PCR扩增
2.3.1 PCR扩增方法
PCR扩增采用引物对葡萄金黄化植原体的16S rRNA基因进行扩增。

2.3.2 PCR扩增条件
PCR扩增条件为：反应体系总体积为25μL，反应体系组成为：10×PCR缓冲液2.5μL，dNTPs混合液0.5μL，MgCl2 1.5μL，引物（10μmol/L）1μL，模板DNA 2μL，Taq DNA聚合酶0.25μL，ddH2O 17.25μL。PCR扩增条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环，72℃延伸10min。

2.4 PCR产物检测
2.4.1 PCR产物检测方法
PCR产物检测采用琼脂糖凝胶电泳法进行检测。

2.4.2 PCR产物检测条件
PCR产物检测条件为：将PCR产物与DNA分子量标准品一起进行琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为：电压120V，电泳时间30min。

相关标准
GB/T 4793.1-2007 植物检疫技术通则 第1部分：检疫鉴定方法的一般规定
GB/T 4793.2-2007 植物检疫技术通则 第2部分：病原体检疫鉴定方法
GB/T 4793.3-2007 植物检疫技术通则 第3部分：有害生物检疫鉴定方法
GB/T 4793.4-2007 植物检疫技术通则 第4部分：检疫处理方法
GB/T 4793.5-2007 植物检疫技术通则 第5部分：检疫证书的填写