SN/T 4877.14-2019
基因条形码筛查方法 第14部分:检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒
发布时间:2019-09-03 实施时间:2020-03-01


检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒是一种重要的植物病毒,能够感染多种植物,如豆科植物、茄科植物、菜科植物等,引起严重的经济损失。为了防止该病毒的传播和扩散,需要对其进行快速、准确的检测。基因条形码技术是一种高通量、高效率的分子生物学技术,已经广泛应用于植物病毒的检测和鉴定。本标准旨在规定基因条形码筛查方法检测检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒的技术要求、试验方法、结果判定和报告编制等。

1.技术要求
1.1 仪器设备
本标准所需的仪器设备包括PCR仪、电泳仪、DNA纯化试剂盒、PCR试剂盒、DNA浓度计等。

1.2 试剂和材料
本标准所需的试剂和材料包括PCR试剂盒、DNA纯化试剂盒、DNA模板、引物等。

1.3 实验环境
实验室应具备洁净、无菌、无污染的条件,实验操作应遵守生物安全规范。

2.试验方法
2.1 样品采集和处理
样品采集应选择病毒病症状明显的植株,采集叶片或茎部组织,避免采集受伤、老化或死亡的组织。样品处理应遵循生物安全规范,避免交叉污染。

2.2 DNA提取
样品DNA提取应使用DNA纯化试剂盒,按照试剂盒说明书进行操作。

2.3 PCR扩增
PCR扩增应使用PCR试剂盒,按照试剂盒说明书进行操作。PCR反应体系为25μL,反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环,最后72℃延伸10min。

2.4 电泳分析
PCR扩增产物应进行电泳分析,分析条件为:电泳电压120V,电泳时间30min,电泳缓冲液为TAE缓冲液。

3.结果判定
3.1 PCR扩增结果
PCR扩增结果应根据电泳图判定,出现目的条带大小为约400bp的条带,即为阳性结果;未出现目的条带,即为阴性结果。

3.2 结果报告
结果报告应包括样品编号、检测结果、检测时间、检测人员等信息。

相关标准
GB/T 28001-2011 职业健康安全管理体系规范要求
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GB/T 24001-2016 环境管理体系要求及使用指南
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