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单核细胞增生李斯特氏菌是一种常见的食源性病原菌,能够引起人类的严重疾病,如脑膜炎、败血症等。为了保障出口食品的质量和安全,需要对出口食品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检验。本标准采用实时荧光PCR内标法进行检测,具有快速、准确、灵敏等优点。
1. 检验原理
实时荧光PCR内标法是一种基于PCR技术的检测方法,通过引入内标分子,可以减少样品中的误差,提高检测的准确性和灵敏度。本标准采用的实时荧光PCR内标法是基于TaqMan探针的方法,通过检测样品中的单核细胞增生李斯特氏菌16S rRNA基因和内标分子的荧光信号,来确定样品中单核细胞增生李斯特氏菌的存在与否。
2. 检验步骤
(1)样品制备:将样品加入适量的PBS缓冲液中,进行均质处理,制备样品提取液。
(2)DNA提取:采用商用DNA提取试剂盒进行DNA提取。
(3)PCR反应:将提取的DNA加入PCR反应体系中,进行PCR扩增。
(4)数据分析:通过实时荧光PCR仪器进行数据分析,确定样品中单核细胞增生李斯特氏菌的存在与否。
3. 检验结果的判定
本标准采用CT值的方法来判定样品中单核细胞增生李斯特氏菌的存在与否。当样品中单核细胞增生李斯特氏菌的CT值小于等于35时,判定为阳性;当CT值大于35时,判定为阴性。
相关标准:
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 嗜盐单胞菌属、单核细胞增生李斯特氏菌检验
2. GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 大肠杆菌检验
3. GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 菌落计数法测定酵母和霉菌总数
4. GB/T 4789.15-2016 食品微生物学检验 铜绿假单胞菌检验
5. GB/T 4789.38-2016 食品微生物学检验 肠炎沙门氏菌检验