SN/T 5205-2020
柏平缕瓜花叶病毒检疫鉴定方法
发布时间:2020-12-30 实施时间:2021-07-01
柏平缕瓜花叶病毒是一种重要的植物病毒,能够感染多种植物,如瓜类、豆科、十字花科等,对农业生产造成了严重的危害。为了保障我国农业生产的安全,需要对进出口的植物材料进行柏平缕瓜花叶病毒的检疫鉴定。
本标准主要包括两种检测方法:ELISA和RT-PCR。
ELISA方法是一种基于抗原与抗体反应的检测方法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。具体操作步骤如下:
1. 样品制备:将待检样品(如叶片、茎、果实等)切碎,加入磷酸盐缓冲液中,制备10%的悬浮液。
2. 酶联免疫吸附试验:将制备好的悬浮液加入包被了柏平缕瓜花叶病毒抗体的96孔板中,与抗体结合后加入辣根过氧化物酶标记的二抗,再加入底物,最后测定吸光度值。
3. 结果判定:根据吸光度值判断样品是否为柏平缕瓜花叶病毒阳性。
RT-PCR方法是一种基于病毒核酸扩增的检测方法,具有高灵敏度、高特异性、快速等优点。具体操作步骤如下:
1. 样品制备:将待检样品(如叶片、茎、果实等)切碎,加入提取液中,提取病毒RNA。
2. RT-PCR扩增:将提取的RNA进行逆转录反应,得到cDNA,再进行PCR扩增,最后通过凝胶电泳进行检测。
3. 结果判定:根据PCR扩增产物的大小和凝胶电泳结果判断样品是否为柏平缕瓜花叶病毒阳性。
本标准还规定了样品的采集、保存和运输要求,以及实验室设备和试剂的要求。
相关标准
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