SN/T 5334.3-2020
转基因植物产品的数字PCR检测方法 第3部分:转基因玉米
发布时间:2020-12-30 实施时间:2021-07-01


转基因技术是指通过人工手段将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的性状或功能。转基因技术的应用已经广泛,其中转基因植物产品是其中的重要组成部分。数字PCR技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,已经被广泛应用于转基因植物产品的检测和鉴定。本标准规定了转基因玉米的数字PCR检测方法,以保证检测结果的准确性和可靠性。

1.范围
本标准适用于转基因玉米的数字PCR检测方法。

2.检测原理
本标准采用数字PCR技术,通过扩增目标序列和内参序列,计算目标序列与内参序列的比值,从而确定样品中目标序列的含量。

3.试剂和材料
3.1 试剂
本标准所需试剂应符合以下要求:
a) TaqMan探针和引物:应由生产厂家提供,具有高特异性和灵敏度;
b) TaqMan数字PCR Master Mix:应由生产厂家提供,具有高特异性和灵敏度;
c) 模板DNA:应由生产厂家提供,或者按照相关标准制备;
d) 内参DNA:应由生产厂家提供,或者按照相关标准制备。

3.2 材料
本标准所需材料应符合以下要求:
a) 离心管:应为无核RNase、DNase、DNA污染的离心管;
b) PCR板:应为无核RNase、DNase、DNA污染的PCR板;
c) PCR膜:应为无核RNase、DNase、DNA污染的PCR膜;
d) 纯水:应为无核RNase、DNase、DNA污染的纯水。

4.仪器设备
4.1 数字PCR仪:应具有高精度、高灵敏度、高特异性和高重复性。
4.2 离心机:应具有高速、低噪音、低振动和高精度。
4.3 PCR仪:应具有高精度、高温控制和高稳定性。

5.样品处理
5.1 样品采集
样品应按照相关标准采集,避免污染和交叉污染。
5.2 样品提取
样品提取应按照相关标准进行,避免污染和交叉污染。
5.3 样品保存
样品应在-20℃以下保存,避免反复冻融。

6.操作步骤
6.1 DNA定量
使用紫外分光光度计或者其他方法对DNA进行定量。
6.2 PCR反应
按照生产厂家提供的说明书进行PCR反应。
6.3 数据分析
使用数字PCR仪自带的软件进行数据分析,计算目标序列与内参序列的比值,从而确定样品中目标序列的含量。

7.结果判定
7.1 阳性对照
阳性对照应呈现出明显的扩增曲线和荧光信号。
7.2 阴性对照
阴性对照应呈现出平坦的扩增曲线和低荧光信号。
7.3 样品判定
样品中目标序列的含量应符合相关标准的要求。

相关标准
GB/T 28050-2011 转基因植物及其制品的检测方法
GB/T 28051-2011 转基因植物及其制品的标识
GB/T 28052-2011 转基因植物及其制品的安全评价
GB/T 28053-2011 转基因植物及其制品的生态评价
GB/T 28054-2011 转基因植物及其制品的管理