SN/T 5179-2021
二代测序法检测蜚蠊携带细菌性样品制备方法
发布时间:2021-06-18 实施时间:2022-01-01


蜚蠊是一种常见的害虫,它们在人类居住的环境中广泛分布,不仅会对人类的健康造成威胁,还会对食品、衣物等物品造成破坏。蜚蠊携带的细菌性病原体也是人类健康的重要威胁之一。因此,对蜚蠊携带的细菌性样品进行检测具有重要的意义。

二代测序法是一种高通量测序技术,可以对DNA序列进行高效、准确的测定。本标准规定了二代测序法检测蜚蠊携带细菌性样品的制备方法,包括样品采集、样品处理、DNA提取、PCR扩增、文库构建、测序等步骤。

具体步骤如下:

1.样品采集

在蜚蠊出没的地方采集蜚蠊,将其放入离心管中,加入PBS缓冲液,离心沉淀,去除上清液,留下蜚蠊沉淀。

2.样品处理

将蜚蠊沉淀加入消毒水中,浸泡10分钟,然后用PBS缓冲液洗涤3次,去除消毒水中的残留物质。

3.DNA提取

将样品加入DNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书进行DNA提取。

4.PCR扩增

将提取的DNA加入PCR反应体系中,进行PCR扩增。

5.文库构建

将PCR产物进行文库构建,包括末端修复、连接、文库扩增等步骤。

6.测序

将文库进行测序,得到测序数据。

本标准要求在样品采集、处理、DNA提取、PCR扩增、文库构建、测序等步骤中,应严格控制污染,避免假阳性结果的产生。

相关标准:
GB/T 4789.3-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 耐热性芽孢杆菌检验
GB/T 4789.10-2016 食品微生物学检验 大肠埃希菌检验
GB/T 4789.11-2016 食品微生物学检验 菌落总数检验