梨波氏盘菌果腐病菌是一种危害梨树的病原菌，能引起果实腐烂、枯萎等症状，对梨树的生长和产量造成严重影响。为了防止该病菌的传播和扩散，需要对进出口的梨果实、果实包装材料、果树苗木等进行检疫鉴定。本标准规定了梨波氏盘菌果腐病菌的检疫鉴定方法。

1. 适用范围
本标准适用于进出口梨果实、果实包装材料、果树苗木等检疫鉴定。

2. 仪器设备和试剂
2.1 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、玉米粉葡萄糖琼脂培养基（CMD）、麦芽葡萄糖琼脂培养基（YMA）等。
2.2 试剂：无水乙醇、碘酒、石蜡等。

3. 样品采集和处理
3.1 采样时间：在果实成熟期采集样品。
3.2 采样部位：采集果实表面有病斑或病痕的部位。
3.3 采样方法：用消毒的剪刀或刀片将果实表面的病斑或病痕切下，放入消毒的离心管中。
3.4 样品处理：将采集的样品在无菌条件下进行处理，去除果肉和果皮，留下病斑或病痕组织。

4. 菌种分离和纯化
4.1 用无菌的铁针或铲子，取少量样品组织，均匀涂抹在PDA培养基上，放入恒温培养箱中，温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx，培养3-5天。
4.2 从培养基上挑选单个菌落，用无菌的铁针或铲子分别接种在CMD和YMA培养基上，放入恒温培养箱中，温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx，培养3-5天。
4.3 从CMD和YMA培养基上挑选单个菌落，分别接种在PDA培养基上，放入恒温培养箱中，温度为25-28℃，光照强度为2000-3000lx，培养3-5天，得到纯化的菌株。

5. 鉴定
5.1 形态学鉴定：观察菌落形态、菌丝形态、孢子形态等特征，结合文献资料进行鉴定。
5.2 生理生化鉴定：包括氧化酶试验、嫌氧发酵试验、淀粉酶试验、蛋白酶试验、酸碱反应等。
5.3 分子生物学鉴定：采用PCR技术进行鉴定，根据ITS序列进行比对分析。

相关标准
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