大麦条纹花叶病毒是一种重要的植物病毒，能够感染大麦等多种作物，对农业生产造成严重危害。为了保障农业生产和国际贸易安全，需要对大麦种子、种苗、苗木、果实等进行检疫鉴定。本标准规定了大麦条纹花叶病毒检疫鉴定的ELISA和RT-PCR方法。

1.ELISA检测方法
1.1 试剂和设备
1.1.1 96孔酶标板
1.1.2 酶标仪
1.1.3 大麦条纹花叶病毒抗原
1.1.4 大麦条纹花叶病毒抗体
1.1.5 辣根过氧化物酶标记的抗鼠IgG抗体
1.1.6 3,3',5,5'-四甲基联苯二胺（TMB）底物
1.1.7 2M H2SO4停止液
1.2 样品处理
1.2.1 种子：取样品1g，加入10ml生理盐水，搅拌均匀，离心10min，取上清液。
1.2.2 种苗、苗木、果实：取样品1g，加入10ml生理盐水，用搅拌器搅拌均匀，离心10min，取上清液。
1.3 检测步骤
1.3.1 在96孔酶标板中加入100μl上清液，孵育2h。
1.3.2 弃去上清液，用PBS洗板3次。
1.3.3 加入100μl大麦条纹花叶病毒抗体，孵育1h。
1.3.4 弃去抗体，用PBS洗板3次。
1.3.5 加入100μl辣根过氧化物酶标记的抗鼠IgG抗体，孵育1h。
1.3.6 弃去抗体，用PBS洗板3次。
1.3.7 加入100μl TMB底物，孵育30min。
1.3.8 加入50μl 2M H2SO4停止液，测定吸光度值。

2.RT-PCR检测方法
2.1 试剂和设备
2.1.1 RNA提取试剂盒
2.1.2 逆转录试剂盒
2.1.3 PCR试剂盒
2.1.4 PCR仪
2.2 样品处理
2.2.1 种子：取样品1g，加入10ml生理盐水，搅拌均匀，离心10min，取上清液。
2.2.2 种苗、苗木、果实：取样品1g，加入10ml生理盐水，用搅拌器搅拌均匀，离心10min，取上清液。
2.3 检测步骤
2.3.1 提取RNA，逆转录为cDNA。
2.3.2 进行PCR扩增，检测大麦条纹花叶病毒的存在。

相关标准
GB/T 31654-2015 植物病毒检疫鉴定方法
GB/T 31655-2015 植物病毒检疫鉴定试剂
GB/T 31656-2015 植物病毒检疫鉴定设备
GB/T 31657-2015 植物病毒检疫鉴定质量控制
GB/T 31658-2015 植物病毒检疫鉴定报告