SN/T 5554-2022
玉米矮花叶病毒检疫鉴定方法
发布时间:2022-07-07 实施时间:2023-02-01
玉米矮花叶病毒是一种重要的玉米病毒病害,能够引起玉米生长发育异常,导致玉米产量下降。为了保障我国玉米生产的安全,需要对玉米进行病毒检疫鉴定。本标准规定了玉米矮花叶病毒检疫鉴定的PCR和ELISA方法。
1. PCR方法
1.1 试剂和仪器
PCR试剂盒、PCR仪、电泳仪等。
1.2 样品处理
将样品(包括玉米叶片、玉米种子等)进行粉碎,取适量样品加入提取液中,进行病毒RNA的提取。
1.3 PCR反应
将提取的RNA进行逆转录,得到cDNA,然后进行PCR扩增。PCR反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环。PCR扩增产物进行电泳分析。
1.4 结果判定
根据PCR扩增产物的大小和电泳图谱,判断样品是否为玉米矮花叶病毒阳性。
2. ELISA方法
2.1 试剂和仪器
ELISA试剂盒、微孔板、洗板机、酶标仪等。
2.2 样品处理
将样品(包括玉米叶片、玉米种子等)进行粉碎,取适量样品加入提取液中,进行病毒蛋白的提取。
2.3 ELISA反应
将提取的病毒蛋白加入微孔板中,加入抗体进行反应,然后加入酶标记的二抗进行反应,最后加入底物进行显色。ELISA反应结果通过酶标仪进行测定。
2.4 结果判定
根据ELISA反应结果,判断样品是否为玉米矮花叶病毒阳性。
相关标准
GB/T 28469-2012 玉米矮花叶病毒检疫鉴定方法
GB/T 28470-2012 玉米花叶病毒检疫鉴定方法
GB/T 28471-2012 玉米花叶病毒检疫鉴定方法
GB/T 28472-2012 玉米花叶病毒检疫鉴定方法
GB/T 28473-2012 玉米花叶病毒检疫鉴定方法