杂食云卷蛾（Epiphyas postvittana）是一种外来有害生物，属于蛾科。该虫害主要危害果树、葡萄、蔬菜等作物，严重影响农业生产和经济发展。为了防止杂食云卷蛾的传播和危害，需要对其进行检疫鉴定。本标准旨在规范杂食云卷蛾检疫鉴定方法，保障农业生产和贸易安全。

1.范围
本标准适用于杂食云卷蛾的检疫鉴定。

2.样品采集
2.1 样品采集时间
样品采集应在杂食云卷蛾成虫活动期进行，一般为每年的5月至10月。
2.2 样品采集方法
样品采集应在植物上采集，采集时应选择有虫害迹象的植物部位，如果实、叶片、花朵等。采集时应注意不损伤植物，避免影响样品的检测结果。采集的样品应放入密闭袋中，标明采集时间、地点和植物种类等信息。

3.样品处理
3.1 样品处理前准备
将采集的样品放入冰箱中冷藏，保持在4℃以下，不得超过24小时。
3.2 样品处理方法
将样品取出，将样品表面的杂质和污物清除干净，然后将样品切成小块，放入离心管中。加入适量的生理盐水，使样品完全浸泡在生理盐水中，然后用振荡器振荡30分钟，使虫卵和幼虫等杂质分散在生理盐水中。将振荡后的样品离心，将上清液倒入新的离心管中，即为样品处理后的样品液。

4.检测方法
4.1 PCR检测
将样品液中的DNA提取出来，然后进行PCR扩增。PCR扩增条件为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环。扩增后的产物进行凝胶电泳，观察是否有目标条带出现。
4.2 实时荧光定量PCR检测
将样品液中的RNA提取出来，然后进行实时荧光定量PCR检测。实时荧光定量PCR检测条件为：50℃反应10分钟，95℃预变性5分钟，95℃变性10秒，60℃退火30秒，共40个循环。检测结果通过荧光信号的强度来判断是否存在杂食云卷蛾。

5.结果判定
5.1 PCR检测结果判定
如果PCR扩增后的凝胶电泳结果中出现了目标条带，则判定为阳性；如果没有出现目标条带，则判定为阴性。
5.2 实时荧光定量PCR检测结果判定
如果实时荧光定量PCR检测结果中荧光信号的强度超过了阈值，则判定为阳性；如果荧光信号的强度低于阈值，则判定为阴性。

相关标准
GB/T 31665-2019 植物检疫技术 采样方法
GB/T 31666-2019 植物检疫技术 样品处理方法
GB/T 31667-2019 植物检疫技术 PCR检测方法
GB/T 31668-2019 植物检疫技术 实时荧光定量PCR检测方法
GB/T 31669-2019 植物检疫技术 结果判定方法