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一、范围
本标准规定了粮食中黄曲霉毒素B1的胶体金快速定量法测定方法。

二、引用文件
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 191 包装、贮存和运输标志和标记通用规则
GB/T 6688 粮油检验通用规则
GB/T 5009.22 食品中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法
GB/T 20394 粮食及其制品中黄曲霉毒素B1的限量

三、定义
3.1 粮食：指谷类、豆类、薯类、油料、饲料等农作物的种子或根茎等。
3.2 黄曲霉毒素B1：指黄曲霉（Aspergillus flavus）和黄曲霉（Aspergillus parasiticus）等真菌在粮食中产生的黄曲霉毒素B1。
3.3 胶体金：指粒径在1~100 nm之间的金纳米颗粒。

四、原理
将样品中的黄曲霉毒素B1与标准品或抗体结合，形成黄曲霉毒素B1-抗体复合物，再将胶体金标记的二抗加入，形成黄曲霉毒素B1-抗体-胶体金复合物，通过比色法测定胶体金的吸收值，计算出样品中黄曲霉毒素B1的含量。

五、仪器设备和试剂
5.1 电子天平：分度值为0.1mg。
5.2 离心机：最高转速为12000r/min。
5.3 恒温振荡器：温度范围为37℃±1℃，振荡频率为200r/min。
5.4 紫外可见分光光度计：波长范围为400~700nm。
5.5 胶体金标记的二抗：规格为40nm，浓度为1mg/mL。
5.6 黄曲霉毒素B1抗体：规格为1mg/mL。
5.7 标准品：黄曲霉毒素B1标准品。

六、样品的处理
6.1 样品的制备
将样品粉碎并混匀，取适量样品称重，加入适量的磷酸盐缓冲液，振荡混匀，离心沉淀，取上清液进行后续操作。
6.2 样品的稀释
将样品上清液稀释至适宜浓度。

七、操作步骤
7.1 取黄曲霉毒素B1抗体适量加入96孔板中，孵育30min。
7.2 弃去孵育液，加入样品和标准品，孵育30min。
7.3 弃去孵育液，加入胶体金标记的二抗，孵育30min。
7.4 弃去孵育液，加入洗涤缓冲液，洗涤3次。
7.5 加入显色液，孵育10min。
7.6 加入终止液，测定吸光度值。

八、计算
8.1 标准曲线的绘制
取不同浓度的标准品，按照操作步骤进行测定，绘制标准曲线。
8.2 样品中黄曲霉毒素B1的含量计算
按照操作步骤进行测定，根据标准曲线计算出样品中黄曲霉毒素B1的含量。

九、结果表示
结果保留两位小数，单位为μg/kg。

十、质量控制
10.1 重复性：同一样品进行3次测定，结果的相对标准偏差不得大于10%。
10.2 平行测定：同一样品进行2次测定，结果的相对误差不得大于10%。
10.3 加标回收率：在样品中加入一定量的标准品，进行测定，回收率应在80%~120%之间。

相关标准：
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 191 包装、贮存和运输标志和标记通用规则
GB/T 6688 粮油检验通用规则
GB/T 5009.22 食品中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法
GB/T 20394 粮食及其制品中黄曲霉毒素B1的限量