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一、范围
本标准规定了粮食中玉米赤霉烯酮的胶体金快速定量法检测方法。
二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水和气的纯度检验方法
GB/T 5009.201-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.202-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.203-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 液相色谱-紫外检测法
GB/T 5009.28-2003 食品中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱法
三、原理
将样品中的玉米赤霉烯酮与胶体金标记的抗体结合,形成复合物,通过比色法测定复合物的吸光度,计算出样品中玉米赤霉烯酮的含量。
四、仪器和设备
1.分光光度计:可测量450nm波长的分光光度计。
2.离心机:最高转速为12000r/min。
3.微量移液器:1μL、10μL、100μL、1000μL。
4.超纯水制备设备:如超纯水机、超滤器等。
5.振荡器:可控制振荡频率和振幅。
五、试剂和材料
1.玉米赤霉烯酮抗体试剂盒:包括抗体、标记物、稀释液等。
2.玉米赤霉烯酮标准品:纯度≥98%。
3.磷酸盐缓冲液(PBS):PH值为7.4。
4.牛血清白蛋白(BSA):纯度≥98%。
5.甲醛:37%。
6.硫酸:纯度≥98%。
7.氯化钠:纯度≥98%。
8.乙醇:纯度≥98%。
9.去离子水:电阻率≥18.2MΩ/cm。
六、样品的处理
1.样品的制备:将样品粉碎并筛选,取适量样品称重,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,取上清液备用。
2.样品的提取:取适量上清液,加入适量玉米赤霉烯酮标准品,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,取上清液备用。
七、操作步骤
1.取玉米赤霉烯酮抗体试剂盒中的标记物,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,取上清液备用。
2.取适量样品提取液和标记物,加入适量抗体,振荡混合,放置室温下反应30min。
3.加入适量BSA稀释液,振荡混合,放置室温下反应30min。
4.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
5.加入适量甲醛,振荡混合,放置室温下反应30min。
6.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
7.加入适量硫酸,振荡混合,放置室温下反应30min。
8.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
9.加入适量氯化钠,振荡混合,放置室温下反应30min。
10.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
11.加入适量乙醇,振荡混合,放置室温下反应30min。
12.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
13.加入适量去离子水,振荡混合,放置室温下反应30min。
14.离心沉淀,弃上清液,加入适量PBS溶液,振荡混合,离心沉淀,弃上清液。
15.加入适量PBS溶液,振荡混合,测量吸光度。
八、计算
根据标准曲线计算出样品中玉米赤霉烯酮的含量。
九、结果表示
样品中玉米赤霉烯酮的含量应该以μg/kg为单位表示。
十、精密度和准确度
本方法的精密度和准确度应符合GB/T 6682的要求。
相关标准:
GB/T 6682 分析化学实验室水和气的纯度检验方法
GB/T 5009.201-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.202-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.203-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 液相色谱-紫外检测法
GB/T 5009.28-2003 食品中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱法