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一、范围
本标准规定了粮油检验中粮食中赭曲霉毒素A的测定方法，采用超高效液相色谱法进行测定。

二、引用文件
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 粮食、油料和饲料中真菌毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.22 食品中赭曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.23 食品中赭曲霉毒素的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 223.3 钢铁及合金化学分析方法 第三部分：铁的测定 邻二氮杂菲分光光度法

三、定义
3.1 赭曲霉毒素A
赭曲霉毒素A（aflatoxin B1，AFB1）是赭曲霉（Aspergillus flavus）和黄曲霉（Aspergillus parasiticus）等真菌产生的一种黄曲霉毒素，具有强烈的致癌作用。

3.2 样品
样品应当符合GB/T 6688的规定。

3.3 标准品
赭曲霉毒素A的标准品应当符合GB/T 5009.22的规定。

3.4 内标
内标是在样品中加入的一种已知浓度的化合物，用于校正分析过程中的误差。

四、仪器和设备
4.1 超高效液相色谱仪
4.2 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
4.3 称量仪
4.4 超声波清洗仪
4.5 离心机
4.6 氮气吹扫仪

五、试剂和材料
5.1 甲醇：色谱纯
5.2 乙腈：色谱纯
5.3 纯水：经过去离子处理
5.4 氯仿：色谱纯
5.5 硫酸钠：分析纯
5.6 氢氧化钠：分析纯
5.7 硫酸：分析纯
5.8 氯化钠：分析纯
5.9 内标：如GB/T 5009.22所示
5.10 标准品：如GB/T 5009.22所示

六、操作步骤
6.1 样品的制备
将样品研磨成细粉末，称取0.5g样品，加入50mL甲醇-水（80:20，v/v）混合溶液中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液加入10mL离心管中，加入10μL内标溶液，用氮气吹干，再加入1mL氯仿，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液用氮气吹干，加入100μL甲醇，用超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即可进入色谱分析。

6.2 色谱条件
流动相：甲醇-水（60:40，v/v）
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
检测波长：360nm
进样量：10μL

6.3 标准曲线的绘制
取不同浓度的标准品，按照6.1的方法制备样品，进行色谱分析，绘制标准曲线。

6.4 样品的测定
按照6.1的方法制备样品，进行色谱分析，根据标准曲线计算赭曲霉毒素A的含量。

七、结果的计算与表达
样品中赭曲霉毒素A的含量，按照下式计算：
C=（A/A0）×C0×V0/V
其中，C为样品中赭曲霉毒素A的含量，μg/kg；
A为样品中赭曲霉毒素A的峰面积；
A0为内标的峰面积；
C0为标准品中赭曲霉毒素A的质量浓度，μg/mL；
V0为内标溶液的体积，μL；
V为样品溶液的体积，mL。

八、精密度和准确度
8.1 精密度
在同一天内，重复测定6个样品，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于10%。

8.2 准确度
在同一天内，测定3个不同浓度的标准品，计算回收率，回收率应在90%~110%之间。

九、质量控制
9.1 仪器的校准
按照GB/T 6682的规定进行仪器的校准。

9.2 样品的平行测定
对同一样品进行平行测定，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于10%。

9.3 质量控制样品的测定
每批样品中应当加入质量控制样品，计算回收率，回收率应在90%~110%之间。

十、报告
报告中应当包括样品的来源、样品的处理方法、测定结果、测定方法、仪器和设备、试剂和材料、操作步骤、结果的计算与表达、精密度和准确度、质量控制等内容。

相关标准：
GB/T 6688 粮食、油料和饲料中真菌毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.22 食品中赭曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.23 食品中赭曲霉毒素的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 223.3 钢铁及合金化学分析方法 第三部分：铁的测定 邻二氮杂菲分光光度法
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格