一、范围
本标准适用于花椒及花椒加工产品中花椒酰胺总含量的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格及试验方法
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 20378.2 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
GB/T 20378.3 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量
GB/T 20378.4 食品安全国家标准 食品中非法添加物最大残留限量

三、原理
样品经乙腈提取，经过固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱法进行分析。在特定条件下，花椒酰胺总含量与检测器信号呈线性关系。

四、仪器设备和试剂
4.1 仪器设备
高效液相色谱仪：包括泵、进样器、柱温箱、检测器等。
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
固相萃取柱：C18固相萃取柱，500mg/6mL。
pH计：0~14pH。
电子天平：0.1mg。
超声波清洗器：功率≥200W，频率40kHz。
4.2 试剂
乙腈：色谱纯。
磷酸二氢钾：分析纯。
乙酸钠：分析纯。
乙酸：分析纯。
水：去离子水或经纯化的水。
标准品：花椒酰胺标准品。

五、样品处理
5.1 样品的准备
将样品粉碎，过筛，取适量样品称重，加入50mL乙腈中，超声处理30min，离心10min，取上清液过滤，取适量过滤液进入固相萃取柱中，用乙腈-水（95:5）洗脱，收集洗脱液，旋蒸至干燥，加入1mL乙腈中溶解，摇匀，过滤，取上清液进入进样瓶中。

5.2 样品的处理
取适量标准品，加入50mL乙腈中，超声处理30min，离心10min，取上清液过滤，取适量过滤液进入固相萃取柱中，用乙腈-水（95:5）洗脱，收集洗脱液，旋蒸至干燥，加入1mL乙腈中溶解，摇匀，过滤，取上清液进入进样瓶中。

六、操作步骤
6.1 仪器条件
流速：1.0mL/min。
柱温：30℃。
检测器：紫外检测器，波长210nm。
进样量：10μL。

6.2 色谱条件
移液管中加入0.1mol/L磷酸二氢钾-乙酸钠缓冲液（pH=3.0）和乙腈（95:5），梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测器波长210nm。

6.3 样品测定
将样品进样，记录峰面积，计算花椒酰胺总含量。

七、计算
样品中花椒酰胺总含量的计算公式为：
C=（As-A0）/A1×C1
式中：
C——样品中花椒酰胺总含量，mg/kg；
As——样品峰面积；
A0——空白峰面积；
A1——标准品峰面积；
C1——标准品浓度，mg/mL。

八、结果表示
样品中花椒酰胺总含量的结果应四舍五入保留两位小数，单位为mg/kg。

九、质量控制
9.1 空白试验
在样品处理过程中，不加入样品，按照操作步骤进行处理，测定空白峰面积，检查是否有干扰峰。

9.2 标准品试验
按照操作步骤进行处理，测定标准品峰面积，计算标准品浓度。

9.3 加标回收试验
在样品中加入已知量的标准品，按照操作步骤进行处理，测定峰面积，计算加标回收率。

十、分析报告
分析报告应包括以下内容：
样品名称、编号、重量、提取剂、提取时间、提取温度、提取方法、测定方法、测定结果、分析人员、审核人员、报告日期等。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格及试验方法
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 20378.2 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
GB/T 20378.3 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量
GB/T 20378.4 食品安全国家标准 食品中非法添加物最大残留限量