一、范围
本标准适用于尿中对硝基酚的高效液相色谱测定。

二、仪器设备
1. 高效液相色谱仪
2. 毒理学实验室用离心机
3. 电子天平
4. 紫外可见分光光度计

三、试剂和材料
1. 对硝基酚标准品
2. 甲醇
3. 乙腈
4. 磷酸二氢钾
5. 磷酸氢二钠
6. 磷酸三氢钠
7. 水

四、操作步骤
1. 取尿样10ml，加入离心管中，离心10min，取上清液。
2. 取上清液1ml，加入10ml离心管中，加入甲醇1ml，离心10min，取上清液。
3. 取上清液1ml，加入10ml离心管中，加入乙腈1ml，离心10min，取上清液。
4. 取上清液1ml，加入试管中，加入磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钠0.1g，磷酸三氢钠0.1g，水10ml，混合均匀。
5. 用紫外可见分光光度计测定样品吸光度值，计算对硝基酚的含量。

五、结果计算
对硝基酚的含量（mg/L）=（样品吸光度值-空白吸光度值）×对硝基酚标准品浓度×10

六、质量控制
1. 标准曲线的制备：取对硝基酚标准品，分别加入甲醇中制成不同浓度的标准溶液，用紫外可见分光光度计测定吸光度值，绘制标准曲线。
2. 空白对照：取同样的试剂和材料，按照操作步骤进行操作，但不加入尿样。
3. 质量控制样品：取已知浓度的对硝基酚标准品，按照操作步骤进行操作，作为质量控制样品。

相关标准
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4. GB/T 5009.36-2016 食品中硝基二甲苯的测定 高效液相色谱法
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