尿中肌酐是评价肾功能的重要指标之一，其测定方法的准确性和精确度对于临床诊断和治疗具有重要意义。本标准采用反相高效液相色谱法测定尿中肌酐，具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点。

1. 原理
样品中的肌酐在酸性条件下与2,4-二硝基苯胺反应生成紫色化合物，通过反相高效液相色谱法测定其吸光度，从而计算出样品中肌酐的含量。

2. 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 反相色谱柱
2.3 恒温器
2.4pH计
2.5 称量器
2.6 离心机

3. 试剂和材料
3.1 肌酐标准品
3.2 2,4-二硝基苯胺
3.3 磷酸二氢钾
3.4 磷酸氢二钠
3.5 乙腈
3.6 纯水

4. 操作步骤
4.1 样品制备
取适量尿液，离心去除杂质，取上清液，加入等体积的0.1mol/L磷酸二氢钾溶液，混匀后即为样品。

4.2 色谱条件
柱温：25℃
流速：1.0mL/min
检测波长：520nm
进样量：20μL

4.3 标准曲线的绘制
取不同浓度的肌酐标准品，按照上述方法测定其吸光度，绘制标准曲线。

4.4 样品测定
按照上述方法测定样品的吸光度，并根据标准曲线计算出样品中肌酐的含量。

5. 结果计算
样品中肌酐的含量（mg/dL）=（样品吸光度-空白吸光度）/标准曲线斜率

6. 精密度和准确度
6.1 精密度：同一样品在同一天内重复测定6次，相对标准偏差不大于2.0%。
6.2 准确度：加入已知浓度的肌酐标准品，测定其回收率，回收率在98.0%~102.0%之间。

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