天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate Aminotransferase，AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，参与氨基酸代谢和葡萄糖代谢等生物化学反应。AST的测定对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。本标准提供了一种测定AST催化活性浓度的参考方法。

1. 原理
本方法利用无磷酸吡哆醛（Pyridoxal-5'-phosphate，PLP）作为辅酶，将L-天门冬氨酸和α-酮戊二酸转化为L-谷氨酸和L-丙酮酸，同时生成的谷氨酸与2,4-二硝基苯肼（2,4-DNPH）反应，生成红色沉淀物，通过比色法测定沉淀物的吸光度，计算出AST的催化活性浓度。

2. 试剂和仪器
2.1 试剂
（1）L-天门冬氨酸
（2）α-酮戊二酸
（3）2,4-二硝基苯肼
（4）无磷酸吡哆醛
（5）磷酸盐缓冲液
（6）氯化钾
（7）氯化钠
（8）蒸馏水
2.2 仪器
（1）分光光度计
（2）离心机
（3）恒温水浴器
（4）pH计

3. 操作步骤
3.1 样品处理
将待测样品离心，取上清液进行测定。如样品中含有脂质、胆红素等干扰物质，需进行去除或纠正。

3.2 试剂配置
（1）磷酸盐缓冲液：pH 7.4，含氯化钾0.1 mol/L，氯化钠0.15 mol/L。
（2）2,4-二硝基苯肼溶液：0.5 g/L。
（3）无磷酸吡哆醛溶液：0.5 g/L。

3.3 操作步骤
（1）取两个试管，分别加入0.1 mL样品和0.1 mL磷酸盐缓冲液，作为对照组。
（2）取两个试管，分别加入0.1 mL样品和0.1 mL磷酸盐缓冲液，加入0.1 mLL-天门冬氨酸和0.1 mLα-酮戊二酸，混匀后放置于恒温水浴器中，37℃反应15 min。
（3）加入0.1 mL2,4-二硝基苯肼溶液，混匀后放置于室温下15 min。
（4）加入0.1 mL无磷酸吡哆醛溶液，混匀后放置于室温下15 min。
（5）加入0.5 mL蒸馏水，混匀后离心5 min，取上清液进行比色测定。
（6）用对照组的吸光度值进行空白校正，计算出样品的AST催化活性浓度。

4. 结果计算
AST催化活性浓度的计算公式为：
AST催化活性浓度（U/L）=（样品吸光度-对照组吸光度）×总体积/（吸光系数×反应时间×样品体积）
其中，吸光系数为0.00622，反应时间为15 min，样品体积为0.1 mL，总体积为1 mL。

5. 结果判定
根据AST催化活性浓度的参考范围，判断样品是否正常或异常。

相关标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 191-2008 化学分析方法通用规定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 6682-2012 分析化学实验室通用规定
GB/T 8170-2008 产品标准通用规定