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丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）是一种常见的肝脏酶，其催化活性浓度的测定对于肝脏疾病的诊断和治疗具有重要意义。本标准参考方法采用无磷酸吡哆醛作为底物，通过测定反应产物吸光度的变化来计算ALT的催化活性浓度。

1. 原理
ALT催化底物丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸，反应中同时生成的无磷酸吡哆醛与谷氨酸反应生成吡啶酮酸，吡啶酮酸的产生量与ALT的催化活性浓度成正比。通过测定吡啶酮酸的吸光度变化来计算ALT的催化活性浓度。

2. 试剂和仪器
（1）试剂：无磷酸吡哆醛、丙氨酸、α-酮戊二酸、谷氨酸、丙酮酸、磷酸盐缓冲液、氯化钾、氯化钠、EDTA、酒精、氯仿、去离子水等。
（2）仪器：分光光度计、离心机、pH计、恒温水浴器等。

3. 操作步骤
（1）制备反应液：将磷酸盐缓冲液、氯化钾、氯化钠、EDTA、丙氨酸、α-酮戊二酸、无磷酸吡哆醛混合制备反应液。
（2）加入样品：将待测样品加入反应液中，混匀后放置于恒温水浴器中孵育一定时间。
（3）终止反应：加入酒精终止反应，离心沉淀。
（4）测定吸光度：将上清液取出，加入氯仿混匀后离心分离，取上清液测定吸光度。
（5）计算催化活性浓度：根据吸光度变化计算ALT的催化活性浓度。

4. 结果计算
根据吸光度变化计算ALT的催化活性浓度，计算公式如下：
ALT催化活性浓度（U/L）=（ΔA/min）×Vt/ε×Vp
其中，ΔA为吸光度变化值，min为反应时间（分钟），Vt为总体积（mL），ε为吡啶酮酸的摩尔吸光系数（6.22×10^3 L/mol·cm），Vp为取样体积（mL）。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 19077.1-2015 生物技术实验室通用要求 第1部分：通用规范
GB/T 21415-2008 分析化学实验室质量控制规范