实时荧光PCR是一种高灵敏度、高特异性的分子生物学检测方法,可以用于快速、准确地鉴定牛、羊、鹿等动物的来源。本标准主要适用于食品、药品、化妆品等领域中对牛、羊、鹿源性成分的鉴定。
1 技术要求
1.1 仪器设备
实时荧光PCR仪、离心机、PCR工作台、微量移液器、PCR试管、离心管、无菌吸管等。
1.2 试剂和材料
PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、DNA纯化试剂盒、DNA分子量标准品、PCR试管、离心管、无菌吸管等。
1.3 质量控制
实验室应建立完善的质量控制体系,包括实验室环境、仪器设备、试剂和材料、操作人员等方面的质量控制。
2 试验步骤
2.1 样品处理
将待检样品加入DNA提取试剂盒中,按照说明书提取DNA,并用DNA纯化试剂盒纯化DNA。
2.2 PCR反应
将PCR试管中加入PCR试剂盒中的反应体系,包括模板DNA、引物、探针、酶等,进行PCR反应。
2.3 数据分析
通过实时荧光PCR仪获取PCR反应的荧光信号,进行数据分析和结果判定。
3 结果判定
3.1 阳性对照
每次实验应设置阳性对照,以验证PCR反应的可靠性和准确性。
3.2 阴性对照
每次实验应设置阴性对照,以验证样品中不存在污染。
3.3 结果判定
根据实验结果,判断样品中是否存在牛、羊、鹿等动物的DNA。
4 相关标准
GB/T 5009.268-2016 食品中动物源性成分的检验
GB/T 22442-2008 食品安全国家标准 食品中动物源性成分的检验
GB/T 18979-2003 食品安全国家标准 食品中动物源性成分的检验
GB/T 22443-2008 食品安全国家标准 食品中动物源性成分的定量检验
GB/T 22444-2008 食品安全国家标准 食品中动物源性成分的定性检验