苏丹红是一种有毒的染料，常用于染色和标记食品、化妆品、药品等。然而，苏丹红对人体健康有害，因此被禁止在食品和化妆品中使用。为了保障消费者的健康，需要对化妆品中的苏丹红进行检测。本标准提供了一种高效液相色谱法测定化妆品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的方法。

1. 原理

将样品中的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分离并定量测定。使用高效液相色谱法，以C18反相色谱柱为固定相，乙腈-水为流动相，检测波长为500nm，外标法定量。

2. 仪器和设备

2.1 高效液相色谱仪

2.2 色谱柱：C18反相色谱柱

2.3 称量仪

2.4 超声波清洗仪

2.5 恒温振荡器

2.6 紫外可见分光光度计

3. 试剂和材料

3.1 甲醇：色谱纯

3.2 乙腈：色谱纯

3.3 纯水

3.4 苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准品

3.5 化妆品样品

4. 操作步骤

4.1 样品制备

将化妆品样品称取适量，加入甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取滤液定容。

4.2 标准曲线制备

取苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准品，分别称取适量，加入甲醇中，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液过滤，取滤液定容。取不同浓度的标准品溶液，注入色谱仪中，测定吸光度，绘制标准曲线。

4.3 样品测定

取样品溶液，注入色谱仪中，测定吸光度，根据标准曲线计算出苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量。

5. 结果计算

化妆品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量，按下式计算：

C = (A - B) / a

其中，C为苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量，mg/kg；A为样品溶液的吸光度；B为空白溶液的吸光度；a为标准曲线斜率。

6. 精密度和准确度

6.1 精密度

在同一天内，重复测定6次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于5%。

6.2 准确度

加入已知浓度的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准品，测定其含量，计算回收率，回收率应在90%~110%之间。

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