牙膏是人们日常生活中常用的一种口腔清洁用品，其中添加了多种成分，如氟化物、抗菌剂、香料等。其中，4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）是一种常用的抗菌剂，能够有效地抑制口腔中的细菌生长，保持口腔清洁。然而，过量的凝血酸会对人体健康造成危害，因此需要对牙膏中的凝血酸含量进行测定。

本标准采用高效液相色谱串联质谱法进行测定。该方法具有灵敏度高、准确性好、重现性高等优点，能够满足对牙膏中凝血酸含量的测定要求。

具体操作步骤如下：

1. 样品制备

将牙膏样品取出约1g，加入50mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液加入10mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，即得到样品溶液。

2. 标准曲线制备

取凝血酸标准品0.1mg/mL的适量，加入10mL锥形瓶中，加入甲醇稀释至不同浓度的标准溶液，分别为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100ng/mL。

3. 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（2.1mm×50mm，1.8μm）

流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为甲酸乙腈溶液

梯度程序：0-0.5min，5% B；0.5-2.5min，5%-95% B；2.5-3.5min，95% B；3.5-3.6min，95%-5% B；3.6-5.0min，5% B

流速：0.3mL/min

柱温：40℃

进样量：5μL

4. 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）

离子极性：正离子模式

离子扫描：多反应监测（MRM）

5. 数据处理

利用标准曲线计算样品中凝血酸的含量。

相关标准
GB/T 32122-2015 牙膏中氟化物的测定 离子选择电极法

GB/T 32123-2015 牙膏中氯化物的测定 滴定法

GB/T 32124-2015 牙膏中亚硝酸盐的测定 分光光度法

GB/T 32125-2015 牙膏中氨基酸的测定 高效液相色谱法

GB/T 32126-2015 牙膏中甘油的测定 毛细管气相色谱法