维生素B6是人体必需的营养素之一，它在人体内参与多种代谢过程，如蛋白质代谢、糖代谢、脂肪代谢等。因此，维生素B6在化妆品中的应用也越来越广泛。为了保证化妆品中维生素B6的质量，需要对其进行测定。本标准提供了一种高效液相色谱法测定化妆品中维生素B6的方法。

1 范围
本标准规定了化妆品中维生素B6（吡哆素、盐酸吡哆素、吡哆素脂肪酸酯及吡哆醛 5-磷酸酯）的测定方法。

2 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
2.3 称量仪
2.4 超声波清洗仪
2.5 离心机

3 试剂和材料
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 乙腈：色谱纯
3.3 磷酸二氢钾：分析纯
3.4 磷酸氢二钠：分析纯
3.5 水：超纯水或蒸馏水
3.6 维生素B6标准品：纯度≥98%
3.7 化妆品样品

4 样品的制备
4.1 取适量化妆品样品，加入适量甲醇，超声波清洗10min，离心10min，取上清液。
4.2 取适量上清液，加入适量乙腈，超声波清洗10min，离心10min，取上清液。

5 操作步骤
5.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（35:65）
流速：1.0mL/min
检测波长：290nm
柱温：30℃
进样量：20μL

5.2 标准曲线的制备
5.2.1 取维生素B6标准品0.1mg/mL的溶液，用甲醇稀释得到不同浓度的标准溶液。
5.2.2 用高效液相色谱法测定各标准溶液的峰面积，绘制标准曲线。

5.3 样品的测定
5.3.1 用高效液相色谱法测定样品的峰面积。
5.3.2 根据标准曲线计算样品中维生素B6的含量。

6 结果的计算
6.1 标准曲线的计算
标准曲线的方程为：y=ax+b，其中y为峰面积，x为维生素B6的浓度，a为斜率，b为截距。
6.2 样品中维生素B6的含量计算
样品中维生素B6的含量（mg/g）=样品中维生素B6的峰面积/标准曲线的斜率×进样量/样品的质量

7 精密度和准确度
7.1 精密度
在同一天内，重复测定6个样品，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于5%。
7.2 准确度
加入已知量的维生素B6标准品到样品中，测定其回收率，回收率应在95%~105%之间。

相关标准
GB/T 26373-2010 化妆品中维生素B6的测定 高效液相色谱法
GB/T 26374-2010 化妆品中维生素B6的测定 毛细管电泳法
GB/T 26375-2010 化妆品中维生素B6的测定 比色法
GB/T 26376-2010 化妆品中维生素B6的测定 高效液相色谱-串联质谱法
GB/T 26377-2010 化妆品中维生素B6的测定 液相色谱法