本标准适用于畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。本标准采用高效液相色谱法测定土霉素、四环素、金霉素残留量。

1. 原理
样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法进行分离，检测器检测后，根据标准曲线计算出土霉素、四环素、金霉素的残留量。

2. 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱
2.3 称量仪
2.4 超声波清洗仪
2.5 离心机
2.6 恒温振荡器
2.7 紫外可见分光光度计

3. 试剂和材料
3.1 土霉素、四环素、金霉素标准品
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 磷酸二氢钾
3.5 磷酸氢二钠
3.6 氯仿
3.7 硫酸钠
3.8 氢氧化钠
3.9 氯化钠
3.10 氨水
3.11 纯水

4. 样品的处理
4.1 样品的准备
将畜禽肉样品取适量，粗切成小块，加入磷酸二氢钾溶液，超声波清洗10min，离心，取上清液，加入氯仿，振荡混合，离心，取上清液，加入硫酸钠，振荡混合，离心，取上清液，加入氢氧化钠，振荡混合，离心，取上清液，加入氯化钠，振荡混合，离心，取上清液，加入氨水，振荡混合，离心，取上清液，加入乙腈，振荡混合，离心，取上清液，过滤，取滤液备用。
4.2 样品的处理
取适量样品，按照4.1的方法进行处理，得到样品提取液。

5. 操作步骤
5.1 标准曲线的制备
取土霉素、四环素、金霉素标准品，分别加入甲醇中制成1mg/mL的标准溶液，再分别稀释成0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50μg/mL的标准溶液，用高效液相色谱法进行检测，得到标准曲线。
5.2 样品的检测
取样品提取液，用高效液相色谱法进行检测，根据标准曲线计算出土霉素、四环素、金霉素的残留量。

6. 结果的计算
6.1 标准曲线的计算
用标准曲线计算出土霉素、四环素、金霉素的残留量。
6.2 样品的计算
用高效液相色谱法检测出土霉素、四环素、金霉素的残留量，根据标准曲线计算出样品中土霉素、四环素、金霉素的残留量。

7. 结果的表示
结果应该以μg/kg为单位，保留两位小数。

相关标准
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