蜂蜜是一种天然的食品，具有多种营养成分和药用价值。羟甲基糠醛是一种常见的蜂蜜中的有机物，其含量的测定对于蜂蜜的质量控制和安全性评价具有重要意义。本标准规定了蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，采用液相色谱-紫外检测法。

1. 范围
本标准适用于蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定。

2. 原理
将蜂蜜样品经过适当的前处理后，采用液相色谱-紫外检测法测定羟甲基糠醛的含量。

3. 仪器和设备
3.1 液相色谱仪：具有紫外检测器和色谱柱。
3.2 称量仪：精度为0.1mg。
3.3 超声波清洗器：功率为100W，频率为40kHz。
3.4 恒温水浴器：温度范围为20℃~100℃。
3.5 离心机：最高转速为10000r/min。

4. 试剂和材料
4.1 羟甲基糠醛标准品：纯度不低于98%。
4.2 甲醇：色谱纯。
4.3 磷酸二氢钾：分析纯。
4.4 磷酸氢二钠：分析纯。
4.5 水：离子交换纯水或蒸馏水。
4.6 蜂蜜样品：经过筛选和前处理后的蜂蜜样品。

5. 样品的前处理
5.1 取适量的蜂蜜样品，加入等量的水，混合均匀。
5.2 加入甲醇，使其浓度为50%。
5.3 超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液。
5.4 取上清液1mL，加入磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钠0.1g，加水定容至10mL，混合均匀，过滤。

6. 操作步骤
6.1 标准曲线的制备
6.1.1 取羟甲基糠醛标准品0.1mg/mL，1mL，加入磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钠0.1g，加水定容至10mL，混合均匀，过滤。
6.1.2 取不同浓度的羟甲基糠醛标准品溶液，分别为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL，每个浓度各取1mL，加入磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钠0.1g，加水定容至10mL，混合均匀，过滤。
6.1.3 采用液相色谱-紫外检测法测定各浓度标准品溶液的峰面积，绘制标准曲线。

6.2 样品的测定
6.2.1 取前处理后的样品溶液1mL，加入磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钠0.1g，加水定容至10mL，混合均匀，过滤。
6.2.2 采用液相色谱-紫外检测法测定样品的峰面积。
6.2.3 根据标准曲线计算样品中羟甲基糠醛的含量。

7. 结果的计算与表达
7.1 标准曲线的计算
7.1.1 标准曲线的方程为y=ax+b，其中y为峰面积，x为羟甲基糠醛的浓度，a为斜率，b为截距。
7.1.2 标准曲线的相关系数r不低于0.999。
7.1.3 标准曲线的线性范围为0.01mg/mL~2mg/mL。

7.2 样品的计算
7.2.1 样品中羟甲基糠醛的含量的计算公式为：C=（As/Ax）×Cx，其中C为羟甲基糠醛的含量，mg/kg；As为样品的峰面积；Ax为标准曲线上相应浓度的峰面积；Cx为标准品的浓度，mg/mL。
7.2.2 样品中羟甲基糠醛的含量应取三次测定的平均值。

8. 精密度和准确度
8.1 精密度
8.1.1 在同一实验室内，采用同一仪器、同一试剂和同一操作人员，对同一样品进行三次测定，计算相对标准偏差，不应大于5%。
8.1.2 在不同实验室内，采用不同仪器、不同试剂和不同操作人员，对同一样品进行三次测定，计算相对标准偏差，不应大于10%。

8.2 准确度
8.2.1 在同一实验室内，采用同一仪器、同一试剂和同一操作人员，对同一样品进行测定，计算平均回收率，不应低于95%。
8.2.2 在不同实验室内，采用不同仪器、不同试剂和不同操作人员，对同一样品进行测定，计算平均回收率，不应低于90%。

相关标准
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