1.范围
本标准规定了油菜籽叶绿素含量的测定方法。

2.引用标准
GB/T 601-2002 分析化学通用基本术语
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 21932-2008 油菜籽品种分类和命名
GB/T 22183-2008 油菜籽品质测定 油分含量测定

3.原理
油菜籽叶绿素含量的测定采用分光光度计法，即在特定波长下测定油菜籽叶绿素的吸光度，通过比较标准品和待测样品的吸光度差异，计算出待测样品中叶绿素的含量。

4.仪器和设备
4.1 分光光度计：选择波长范围为400~700nm的分光光度计。
4.2 1cm比色皿：用于容纳待测样品和标准品的比色皿。
4.3 称量器：用于称取待测样品和标准品。

5.试剂和材料
5.1 乙醇：纯度为95%。
5.2 丙酮：纯度为99%。
5.3 氯仿：纯度为99%。
5.4 石油醚：纯度为60~90℃。
5.5 叶绿素标准品：含量为1mg/mL。
5.6 待测样品：油菜籽。

6.操作步骤
6.1 标准曲线的制备
6.1.1 取叶绿素标准品1mL，加入10mL乙醇中，摇匀，称取1mL，加入10mL乙醇中，制备出叶绿素浓度为0.1mg/mL的标准品溶液。
6.1.2 取叶绿素标准品0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和1.0mL，分别加入10mL乙醇中，制备出叶绿素浓度为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL和0.1mg/mL的标准品溶液。
6.1.3 在分光光度计上选择波长为665nm，以乙醇为对照，测定各浓度叶绿素标准品的吸光度。
6.1.4 以叶绿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

6.2 待测样品的测定
6.2.1 取待测样品1g，加入10mL丙酮中，振荡10min，离心5min，取上清液。
6.2.2 取上清液1mL，加入10mL氯仿中，振荡10min，离心5min，取上清液。
6.2.3 取上清液1mL，加入10mL石油醚中，振荡10min，离心5min，取上清液。
6.2.4 取上清液1mL，加入10mL乙醇中，制备出待测样品溶液。
6.2.5 在分光光度计上选择波长为665nm，以乙醇为对照，测定待测样品的吸光度。
6.2.6 根据标准曲线计算出待测样品中叶绿素的含量。

7.结果计算
待测样品中叶绿素的含量，按下式计算：
C = (A-B)/K
式中：
C——待测样品中叶绿素的含量，mg/g；
A——待测样品的吸光度；
B——乙醇的吸光度；
K——标准曲线斜率。

8.精密度和准确度
8.1 精密度：同一实验室内，重复测定5次待测样品，计算相对标准偏差，不得大于5%。
8.2 准确度：同一实验室内，测定3个不同浓度的叶绿素标准品，计算相对误差，不得大于5%。

9.质量控制
9.1 仪器校准：每天使用前，应进行分光光度计的波长校准和零点校准。
9.2 样品处理：待测样品的处理应按照标准操作程序进行，避免操作误差。
9.3 标准曲线：每次测定前，应制备新的标准曲线，确保准确性和精密度。
9.4 质量控制样品：每批次样品中应加入质量控制样品，确保测定结果的准确性和可靠性。

相关标准
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