一、范围
本标准适用于食品中碱性橙染料的检测。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 5009.60 食品中禁用物质的测定 碱性橙染料的检测
GB/T 20388 食品中禁用物质的检测 高效液相色谱法

三、原理
样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法进行检测。样品中的碱性橙染料在特定条件下与色谱柱中的固定相相互作用，分离出来后通过紫外检测器进行检测。

四、仪器和设备
1. 高效液相色谱仪
2. 紫外检测器
3. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，250mm×4.6mm
4. 称量仪
5. 超声波清洗仪
6. 滤膜：0.45μm

五、试剂和材料
1. 乙腈：色谱纯
2. 磷酸二氢钾：分析纯
3. 磷酸氢二钠：分析纯
4. 水：离子交换纯
5. 碱性橙染料标准品：纯度≥98%

六、样品的处理
1. 取适量样品，加入适量水，搅拌均匀。
2. 加入乙腈，超声波清洗10分钟。
3. 离心分离，取上清液。
4. 用0.45μm滤膜过滤。

七、色谱条件
1. 流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（体积比为70:30），pH=3.0
2. 流速：1.0mL/min
3. 柱温：30℃
4. 检测波长：480nm

八、结果计算
1. 碱性橙染料的峰面积与标准品的峰面积比值，得到样品中碱性橙染料的含量。
2. 含量的计算公式：C=（As/A标准品）×C标准品
其中，C为样品中碱性橙染料的含量，As为样品中碱性橙染料的峰面积，A标准品为标准品中碱性橙染料的峰面积，C标准品为标准品中碱性橙染料的浓度。

九、质量控制
1. 样品的加标回收率应在80%~120%之间。
2. 每个批次样品应设置空白样品和质控样品。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 5009.60 食品中禁用物质的测定 碱性橙染料的检测
GB/T 20388 食品中禁用物质的检测 高效液相色谱法
GB/T 5009.61 食品中禁用物质的测定 苯甲酸、邻苯二甲酸及其酯类的检测
GB/T 5009.62 食品中禁用物质的测定 苯并芘的检测