卵磷脂是一种重要的磷脂类物质，广泛存在于动物和植物细胞膜中，具有重要的生物学功能。卵磷脂中磷脂含量的测定是粮油检验中的一项重要指标，可以用于评价食品的质量和安全性。本标准采用高效液相色谱蒸发光散射检测法，具有灵敏度高、准确性好、重现性好等优点。

1.范围
本标准规定了卵磷脂中磷脂含量的测定方法。

2.引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范与评价标准
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规程
GB/T 20394-2006 食品中磷脂的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.5-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
GB/T 5009.6-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 液相色谱法

3.原理
将样品中的卵磷脂经过酶解反应，将磷脂酶水解成游离磷脂酸和酰基磷脂酸，再经过蒸发光散射检测器检测游离磷脂酸的浓度，从而计算出卵磷脂中磷脂含量。

4.仪器和设备
高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器、恒温振荡器、离心机、电子天平、超声波清洗器等。

5.试剂和材料
甲醇、氯仿、乙酸乙酯、氯化钠、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、磷脂酶B、磷脂酶酰胺酶、游离磷脂酸标准品等。

6.样品的处理
将样品加入磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、磷脂酶B、磷脂酶酰胺酶等酶解剂，经过酶解反应后，用氯仿-甲醇（2:1）提取，离心分离，取上层液，再用氯化钠溶液调节pH值，用乙酸乙酯萃取，离心分离，取上层液，用氮气吹干，加入甲醇重溶，即可进行高效液相色谱分析。

7.分析条件
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）
流动相：甲醇-水（95:5）
流速：1.0 mL/min
柱温：30℃
检测器：蒸发光散射检测器
检测温度：40℃
氮气流量：1.5 L/min
氮气压力：3.5 bar

8.计算方法
根据游离磷脂酸标准品的峰面积和浓度制作标准曲线，用标准曲线计算出样品中游离磷脂酸的浓度，再根据酶解反应的结果计算出卵磷脂中磷脂含量。

9.结果的表示
结果应该以卵磷脂中磷脂含量的百分比表示。

相关标准
GB/T 20394-2006 食品中磷脂的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.5-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
GB/T 5009.6-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 液相色谱法
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范与评价标准
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规程