GB/T 18086-2000
植物检疫 烟霜霉病菌检疫鉴定方法
发布时间:2000-04-26 实施时间:2000-10-01


烟霜霉病菌是一种常见的烟草病原菌,能够引起烟草叶片上的霉斑病。为了保障烟草及其制品的质量安全,需要对其进行检疫。本标准就是为了规范烟霜霉病菌的检疫鉴定方法。

1. 试验材料
试验材料为烟草叶片或烟草制品。

2. 试验仪器和设备
常规微生物实验室设备和试剂。

3. 试验方法
(1)样品处理
将样品切成小块,用无菌水洗净,晾干备用。

(2)分离纯化
将样品放入含有1%的双氧水的无菌水中浸泡5分钟,然后用无菌水洗净,晾干备用。取适量样品,加入无菌的20%葡萄糖琼脂培养基中,摇晃培养24小时,筛选出单菌落,进行纯化。

(3)形态学鉴定
将纯化后的菌株接种在含有1%葡萄糖的玉米粉琼脂培养基上,培养3-5天,观察菌落形态和色素产生情况。

(4)生理生化鉴定
采用常规生理生化试验方法,如氧化酶试验、卟啉试验、酸碱反应等,进行鉴定。

(5)分子生物学鉴定
采用PCR技术,根据烟霜霉病菌的特异性基因进行扩增和检测。

4. 结果判定
(1)形态学鉴定:烟霜霉病菌菌落呈灰白色,表面有细毛状物,菌落边缘呈波浪状,背面呈淡黄色。

(2)生理生化鉴定:烟霜霉病菌具有氧化酶、卟啉和酸碱反应等特征。

(3)分子生物学鉴定:PCR扩增出特异性基因片段,阳性结果为烟霜霉病菌。

5. 结论
根据样品的形态学、生理生化和分子生物学鉴定结果,判断样品是否为烟霜霉病菌。

相关标准
GB/T 18087-2000 植物检疫 烟草病毒检疫鉴定方法
GB/T 18088-2000 植物检疫 烟草青枯病菌检疫鉴定方法
GB/T 18089-2000 植物检疫 烟草烟青病菌检疫鉴定方法
GB/T 18090-2000 植物检疫 烟草烟草花叶病菌检疫鉴定方法
GB/T 18091-2000 植物检疫 烟草烟草黑腐病菌检疫鉴定方法