一、范围
本标准适用于饲料中金霉素的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 8170 数字表示法和圆整规则
GB/T 14633 饲料中兽药残留量的测定 高效液相色谱法

三、原理
将样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法测定饲料中金霉素的含量。

四、仪器和设备
1. 高效液相色谱仪
2. 恒温振荡器
3. 离心机
4. 电子天平
5. 称量瓶
6. 注射器
7. 色谱柱
8. 洗瓶
9. 称量纸
10. 滤膜

五、试剂和材料
1. 金霉素标准品
2. 甲醇
3. 乙腈
4. 磷酸二氢钾
5. 磷酸氢二钠
6. 氯仿
7. 硫酸钠
8. 氢氧化钠
9. 氯化钠
10. 纯水

六、样品处理
1. 取样品5g，加入50mL甲醇，振荡提取30min，离心10min，取上清液过滤。
2. 取上清液5mL，加入5mL乙腈，振荡提取30min，离心10min，取上清液过滤。
3. 取上清液2mL，加入0.1g磷酸二氢钾，振荡提取30min，离心10min，取上清液过滤。

七、操作步骤
1. 色谱柱洗涤：用甲醇-水（70:30）洗涤色谱柱，直至洗涤液的吸光度稳定。
2. 样品进样：取样品处理后的上清液2μL进样。
3. 色谱条件：流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长280nm。
4. 峰面积计算：用金霉素标准品制成不同浓度的标准曲线，计算样品中金霉素的含量。

八、结果计算
样品中金霉素的含量，按下式计算：
C=（As/Ak）×Ck×V/（m×V1）
式中：
C——样品中金霉素的含量，mg/kg；
As——样品中金霉素的峰面积；
Ak——金霉素标准品的峰面积；
Ck——金霉素标准品的浓度，mg/mL；
V——样品提取液的体积，mL；
m——样品的质量，g；
V1——取样体积，mL。

九、精密度和准确度
1. 精密度：在相同条件下，重复测定6次，相对标准偏差不大于5%。
2. 准确度：加入已知量的金霉素标准品，回收率在90%~110%之间。

十、质量控制
1. 每批样品应设置空白样品和金霉素标准品。
2. 每个样品应重复测定3次，取平均值作为结果。

相关标准
GB/T 14633 饲料中兽药残留量的测定 高效液相色谱法
GB/T 19685 饲料中四环素的测定 高效液相色谱法
GB/T 19686 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法
GB/T 19687 饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱法
GB/T 19688 饲料中链霉素的测定 高效液相色谱法