一、范围
本标准适用于饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定。

二、引用标准
GB/T 191-2008 纸和纸板试样的制备
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 6688-2001 分析化学实验室安全规程
GB/T 8170-2008 数值舍入规则及其在计算中的应用
GB/T 19581-2004 饲料中尿素酶活性的测定

三、定义
3.1 尿素酶活性
单位时间内尿素酶催化尿素水解的速率。

3.2 饲料用大豆制品
经过加工处理的大豆制品，用于动物饲料。

四、原理
将待测样品中的尿素酶与一定量的尿素反应，测定反应后剩余的尿素量，根据反应前后尿素的差值计算尿素酶活性。

五、仪器设备
5.1 恒温水浴器
5.2 离心机
5.3pH计
5.4 分光光度计

六、试剂和材料
6.1 0.1mol/L氢氧化钠溶液
6.2 0.1mol/L硫酸溶液
6.3 0.1mol/L尿素溶液
6.4 0.1mol/L氯化钠溶液
6.5 0.1mol/L磷酸二氢钾溶液
6.6 0.1mol/L磷酸三钠溶液
6.7 0.1%酚酞指示剂溶液
6.8 0.1%碘化钾溶液
6.9 0.1mol/L碳酸氢钠溶液
6.10 0.1mol/L硝酸银溶液
6.11 0.1mol/L硝酸钾溶液
6.12 0.1mol/L硫酸亚铁溶液
6.13 0.1mol/L硫酸铜溶液
6.14 0.1mol/L硝酸铜溶液
6.15 0.1mol/L硝酸铵溶液
6.16 0.1mol/L硝酸钠溶液
6.17 0.1mol/L氯化铵溶液
6.18 0.1mol/L氯化钾溶液
6.19 0.1mol/L氯化钙溶液
6.20 0.1mol/L氯化镁溶液
6.21 0.1mol/L氯化铁溶液
6.22 0.1mol/L氯化铜溶液
6.23 0.1mol/L氯化银溶液
6.24 0.1mol/L氯化铝溶液
6.25 0.1mol/L氯化钡溶液
6.26 0.1mol/L氯化锌溶液
6.27 0.1mol/L氯化锰溶液
6.28 0.1mol/L氯化钴溶液
6.29 0.1mol/L氯化镍溶液
6.30 0.1mol/L氯化铬溶液
6.31 0.1mol/L氯化铅溶液
6.32 0.1mol/L氯化汞溶液
6.33 0.1mol/L氯化银-氯化钾溶液
6.34 0.1mol/L硝酸银-硝酸钾溶液
6.35 0.1mol/L硝酸银-硝酸钠溶液
6.36 0.1mol/L硝酸银-氯化钾溶液
6.37 0.1mol/L硝酸银-氯化钠溶液
6.38 0.1mol/L硝酸银-氯化铵溶液
6.39 0.1mol/L硝酸银-氯化铝溶液
6.40 0.1mol/L硝酸银-氯化钡溶液
6.41 0.1mol/L硝酸银-氯化铁溶液
6.42 0.1mol/L硝酸银-氯化铜溶液
6.43 0.1mol/L硝酸银-氯化锌溶液
6.44 0.1mol/L硝酸银-氯化锰溶液
6.45 0.1mol/L硝酸银-氯化钴溶液
6.46 0.1mol/L硝酸银-氯化镍溶液
6.47 0.1mol/L硝酸银-氯化铬溶液
6.48 0.1mol/L硝酸银-氯化铅溶液
6.49 0.1mol/L硝酸银-氯化汞溶液
6.50 0.1mol/L硝酸银-氯化银-氯化钾溶液
6.51 0.1mol/L硝酸银-硝酸钾-氯化钾溶液
6.52 0.1mol/L硝酸银-硝酸钠-氯化钠溶液
6.53 0.1mol/L硝酸银-氯化钾-氯化钠溶液
6.54 0.1mol/L硝酸银-氯化铵-氯化钾溶液
6.55 0.1mol/L硝酸银-氯化铝-氯化钾溶液
6.56 0.1mol/L硝酸银-氯化钡-氯化钾溶液
6.57 0.1mol/L硝酸银-氯化铁-氯化钾溶液
6.58 0.1mol/L硝酸银-氯化铜-氯化钾溶液
6.59 0.1mol/L硝酸银-氯化锌-氯化钾溶液
6.60 0.1mol/L硝酸银-氯化锰-氯化钾溶液
6.61 0.1mol/L硝酸银-氯化钴-氯化钾溶液
6.62 0.1mol/L硝酸银-氯化镍-氯化钾溶液
6.63 0.1mol/L硝酸银-氯化铬-氯化钾溶液
6.64 0.1mol/L硝酸银-氯化铅-氯化钾溶液
6.65 0.1mol/L硝酸银-氯化汞-氯化钾溶液
6.66 0.1mol/L硝酸银-氯化银-氯化钾-氯化钠溶液
6.67 0.1mol/L硝酸银-硝酸钾-氯化钾-氯化钠溶液
6.68 0.1mol/L硝酸银-硝酸钠-氯化钾-氯化钠溶液
6.69 0.1mol/L硝酸银-氯化钾-氯化钠-氯化铵溶液
6.70 0.1mol/L硝酸银-氯化铝-氯化钾-氯化钠溶液
6.71 0.1mol/L硝酸银-氯化钡-氯化钾-氯化钠溶液
6.72 0.1mol/L硝酸银-氯化铁-氯化钾-氯化钠溶液
6.73 0.1mol/L硝酸银-氯化铜-氯化钾-氯化钠溶液
6.74 0.1mol/L硝酸银-氯化锌-氯化钾-氯化钠溶液
6.75 0.1mol/L硝酸银-氯化锰-氯化钾-氯化钠溶液
6.76 0.1mol/L硝酸银-氯化钴-氯化钾-氯化钠溶液
6.77 0.1mol/L硝酸银-氯化镍-氯化钾-氯化钠溶液
6.78 0.1mol/L硝酸银-氯化铬-氯化钾-氯化钠溶液
6.79 0.1mol/L硝酸银-氯化铅-氯化钾-氯化钠溶液
6.80 0.1mol/L硝酸银-氯化汞-氯化钾-氯化钠溶液

七、样品的制备
将样品粉末称取0.5g，加入50ml的0.1mol/L氢氧化钠溶液中，用恒温水浴器加热至70℃，保持30min，冷却至室温，离心10min，取上清液。

八、操作步骤
8.1 取样品上清液5ml，加入50ml的0.1mol/L尿素溶液中，用恒温水浴器加热至37℃，反应30min。
8.2 加入0.1mol/L硫酸溶液10ml，用0.1mol/L氯化钠溶液调节pH至7.0±0.1。
8.3 加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液10ml，用0.1mol/L磷酸三钠溶液调节pH至7.5±0.1。
8.4 加入0.1%酚酞指示剂溶液，用0.1mol/L碳酸氢钠溶液滴定至溶液由红色变为淡黄色。
8.5 用0.1mol/L硝酸银溶液滴定至溶液由淡黄色变为红色，记录滴定体积V1。
8.6 取另一份样品上清液5ml，加入50ml的0.1mol/L尿素溶液中，用恒温水浴器加热至37℃，反应30min。
8.7 加入0.1mol/L硫酸溶液10ml，用0.1mol/L氯化钠溶液调节pH至7.0±0.1。
8.8 加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液10ml，用0.1mol/L磷酸三钠溶液调节pH至7.5±0.1。
8.9 加入0.1%酚酞指示剂溶液，用0.1mol/L碳酸氢钠溶液滴定至溶液由红色变为淡黄色。
8.10 用0.1mol/L硝酸银溶液滴定至溶液由淡黄色变为红色，记录滴定体积V2。
8.11 用0.1mol/L氯化铵溶液洗涤离心管，用0.1mol/L氯化铵溶液洗涤过滤器，将滤液和洗涤液合并，加入0.1mol/L硝酸银-氯化钾溶液，用0.1mol/L硝酸银-氯化钾溶液滴定至溶液由淡黄色变为红色，记录滴定体积V3。
8.12 用0.1mol/L氯化铵溶液洗涤离心管，用0.1mol/L氯化铵溶涤过滤器，将滤液和洗涤液合并，加入0.1mol/L硝酸银-硝酸钾溶液，用0.1mol/L硝酸银-硝酸钾溶液滴定至溶液由淡黄色变为红色，记录滴定体积V4。

九、计算
尿素酶活性（U/g）=（V1-V2）×0.1×1000/5
其中，V1为第一次滴定体积，V2为第二次滴定体积，0.1为硝酸银溶液的摩尔浓度，1000为单位换算系数，5为样品的质量（g）。

十、结果表示
结果应保留两位小数，单位为U/g。

十一、精密度和准确度
本方法的精密度和准确度参见GB/T 19581-2004。

相关标准
GB/T 19581-2004 饲料中尿素酶活性的测定
GB/T 6437-2015 饲料中粗蛋白的测定
GB/T 6438-2017 饲料中粗脂肪的测定
GB/T 6439-2017 饲料中粗纤维的测定
GB/T 6441-2015 饲料中粗灰分的测定